利迪链霉菌抗菌谱的测定及酶类抗菌物质的活性检测文献综述

 2021-10-26 21:54:57

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文 献 综 述摘要链霉菌是一类革兰氏阳性菌,归属为链霉菌属,在平板拮抗实验室中表现出了良好的抑菌特性,对多种植物病原细菌及细菌有很好的抑制作用,抑菌谱较广[3]。

本文对其发酵液的抗菌谱及其理化性质进行了初步研究,并研究总结了几种链霉菌分泌的蛋白酶,肽聚糖酶,几丁质酶酶活的测定方法。

[2][8][14]关键字 抗菌谱 蛋白酶 肽聚糖酶 几丁质酶 酶活测定 抗菌谱的测定: 拮抗链霉菌的活体抑菌活性测定采用琼脂块法。

将链霉菌孢子制成混悬液并涂布平板,28℃恒温培养5-7天后,制成菌饼(直径7mm)。

将烟草野火病菌菌悬液(2*107-3*107cfu/ml)0.7ml、睡到白叶枯病菌菌悬液(3*107-4*107cfu/ml)0.7ml加到70ml、50℃左右的NA培养基中,制成混菌平板,放置拮抗菌菌饼,28℃恒温培养24h后十字交叉法测量抑菌圈直径[5]。

实验设3次重复。

[1][8][11][12]对15种重要病原真菌的拮抗测定结果发现,JFA-001菌株对香蕉枯萎病菌、香蕉冠腐病菌、辣椒黑斑病菌等多种病原真菌表现出较强的抑菌活性,抑制率均达90%以上, 对其它供试的病原菌的抑制率也都高于70%。

[13][14][15]蛋白酶活的测定方法:蛋白酶酶活常用测定方法有福林酚法、考马斯亮蓝法、斐林反应法等。

但是这些方法需要有提纯的蛋白酶,从链霉菌发酵液中提取蛋白酶会对酶造成不可预知的伤害,是该类方法最大的问题,而且提取出来的蛋白酶无法代表胞内蛋白酶的活性。

本论文最终确定的酶活测定的基本方法:取试管3支,编号1、2、3,每管内加入1%酪蛋白1 mL,置于50℃水浴中预热2min,再加入经同样预热的酶液1mL(酪蛋白溶液与酶液均以0.05mol/L、pH6.0的柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液配制), 精确保温反应4 min,时间到后,立即在每管中加入0.4mol/L三氯乙酸2mL,以终止反应,待残余蛋白质沉淀后过滤,滤液在275nm 下测定吸光度值。

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