春兰CgmiR390c的克隆与表达分析
1.选题来源
课题来源项目名称：林业公益性行业科研专项“艳丽芳香型中国兰新品种定向培育及开发技术研究”。
2.文献综述
2.1春兰概况
春兰（Cymbidium goeringii）是兰科（Orchidaceae ）兰属（Cymbidium）的一类地生兰，植株较小，具假鳞茎，叶带形，其变种、品种繁多，花型有正常花和蝶花两种，花色以绿色、淡黄褐色为主，多数幽香，极具观赏及经济价值。分布于中国陕西南部、甘肃南部、江苏、安徽、浙江、江西、福建、 台湾、河南南部、湖北、湖南、广东、广西、四川、贵州、云南等地。日本与朝鲜半岛南端也有分布[1]。性喜凉爽、湿润和通风透风，忌酷热、干燥和阳光直晒，北方冬季应在温室栽培，最低温度不低于5℃，生长适温为15-25℃[2]。在半阴半阳散射光照的环 境下生长良好，夏季避免阳光直射；喜空气湿润的环境，栽培基质要间干间湿，耐干旱，过湿易烂根；适宜选择排水良好、富含腐殖质、微酸性的腐叶土[3]。
春兰在我国有着十分悠久的栽培历史，开花时幽香阵阵，是名贵的芳香花卉，而其花朵虽不如洋兰艳丽多彩，却颇具淡雅、清幽的气质，多作为盆栽置于室内观赏。被尊为花中“四君子”之一，也是我国传统的十大名花之一，深受人们喜的喜爱。但是，春兰花期短，花芽分化率低，开花时间与市场需求高峰不一致，这极大的制约了兰花的商品价值和产业扩大。我国是兰花资源大国，中国兰花文化产业化生产却起步很晚，加快兰花产业化发展的步伐，是我国花卉业与国际接轨，发展高效生态农业，建设社会主义生态文明的重要举措，我国兰花产业化生产与发达国家和地区相比，存在着很大的差距，繁殖系数低，传统养兰方法效率低，商品兰的品质低等[4]。因此，加强春兰成化调控分子机制的研究具有重要意义。
2.2 miRNA概况
MicroRNA(或miRNA)是位于基因组非编码区的内源性大小为21~25 个核苷酸的小分子单链RNA，在植物新陈代谢、器官发育、生殖生长以及响应各种生物和非生物逆境胁迫中起重要调节作用。这些miRNA 一般是通过调控大量多样的靶基因来调节生物的生命活动反应过程[5]。MicroRNA390（miR390）家族是一个古老的高度保守的家族,通过对靶mRNA 进行切割或造成翻译阻遏来抑制基因的表达。它作用在TAS（Trans-acting siRNA gene）上诱导产生21个碱基长的tasiRNA（Trans-acting siRNA），再靶向作用于生长素因子ARF（Auxin response factor）基因[6]。ARF属于一类转录因子,一般包含3个结构域,能够与生长素响应元件结合,促进或抑制基因的表达。ARF基因受光照、激素与环境条件变化调控其转录水平表达后,通过内源小分子RNA等实现转录后水平的调节,最终达到调控植物生长发育的目的[7]。
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