开题报告内容:
研究目的:
1. 验证桑色素对HUA小鼠的降低血清尿酸水平、促进尿酸排泄的作用,进一步阐明其抗尿酸性肾病的活性。
2. 初步研究桑色素基于EGFR-TLR4轴通路下抗尿酸性肾病的分子机制,探究其对EGFR-TLR4轴通路的调控作用,进而达到抗尿酸性肾病的效果。
研究内容和研究手段:
1. 取昆明种雄性小鼠随机分组,饲养在塑料鼠笼中,可以自由饮水和摄食,室内温度维持在22 2 oC,相对湿度维持在55 5 %,12-h/12-h开关灯(早晨08:00开灯)。小鼠在实验室适应饲养一周后进行相关实验。
2. 通过连续七天口服氧嗪酸钾盐(OX 250mg/kg)诱发建立高尿酸血症(HUA)小鼠模型,别嘌呤醇作为阳性对照药物。设置分析对照组(生理盐水10ml/kg)、HUA模型对照组(OX 250mg/kg)、阳性药对照组(别嘌呤醇10mg/kg、OX 250mg/kg)、桑色素不同剂量给药组(OX 250mg/kg、桑色素10、20、40和80mg/kg)。给药时间为七天,所用药物剂量用mg/kg体重表示,每个剂量药物的给药体积基于每次给药前小鼠体重称重计算。
3. 第6天时,空白对照组、模型对照组及各剂量给药组的小鼠饲养在小鼠代谢笼中,可以自由饮水和摄食,收集其24h尿液并且测量每组的尿液体积。尿样2,000 g离心10min取上清液用于测定尿液尿酸(Uur)和肌酐(Ucr)水平。在最后一次给药后1小时,小鼠尾静脉取血,离心(3,000 g,4 ℃,10min)取血清,置于4 ℃保存,用于测定血清尿酸(Sur)及肌酐(Scr)水平。血清及尿液尿酸水平按文献方法采用磷钨酸还原法测定[43]。血清及尿液肌酐水平采用购买的试剂盒方法进行测定。
4. 在最后一次给药后1小时,小鼠腹腔注射戊巴比妥麻醉,脱颈处死,快速分取肾脏组织,妥善保存,用于后续RT-PCR和Western blot实验。
