海绵固定化蔗糖异构酶产生菌Escherichia coli(pET22b-palⅠ)的研究文献综述

 2021-09-25 01:09

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文 献 综 述1.细胞的固定化技术多数文献对固定化细胞的定义为:被限制自由移动的细胞,即细胞受到物理、化学等因素约束或限制在一定的空间界限内,但细胞仍保留催化活性并具有能被反复或连续使用的活力;也有文献将其定义为:把菌体细胞中特定的酶不经分离提纯,直接用适当的方法将菌体加以固定化来催化各种生化反应[1-3]。

1.1细胞的固定化的特点不管是哪种定义,固定化细胞都有一下特点:细菌生长停滞时间短、细胞浓度大、反应快,有较高的生产能力;细胞被固定化后,不会产生流失现象,可多次重复使用;对污染的抵抗力强,且分离纯化过程中菌体细胞易分离;可连续使用,避免反馈一直和产物消耗,蒸馏或提取前不用分去细胞,保持酶的原始状态,从而加强了稳定性。

固定化细胞也有其自身的缺点,如:必须保持菌体的完整,防止菌体的自溶,否则影响产物的纯度;必须抑制细胞内蛋白酶对所需酶的分解;胞内多酶存在,会形成副产物;载体、细胞膜或细胞壁会造成底物渗透与扩散的障碍[4-7]。

1.2细胞的固定化方法用于制备固定化细胞的方法种类繁多,新方法也层出不穷。

考虑到细胞与载体间的作用力、固定化细胞的状态、载体的来源及固定化细胞的制备过程等因素,将固定化细胞的方法做如下分类:1.2.1吸附法吸附法是利用微生物具有可附着在吸附在固体物质表面或其他细胞表面的能力,用吸附剂将微生物吸附在其表面的方法,主要有离子吸附与物理吸附两类。

离子吸附是运用静电力作用使微生物在解离状态下固定于带有相反电荷的离子交换剂上的过程。

物理吸附是使用吸附能力较高的物质如活性炭、硅藻土等将微生物吸附在表面使其固定化的过程[8]。

这是一种最古老的方法,操作简单,反应条件温和,载体可以反复利用,但结合不牢固,细胞易脱落。

1.2.2共价结合法共价结合法是将菌体活化后,利用微生物细胞表面功能团(如羟基、氨基、嘧啶基、酚基和毓基等)与固相载体表面基团之间形成化学共价键连接,从而成为固定化细胞[9]。

共价结合法具有细胞与载体结合紧密、不易脱落等优点,但其制备较难,且细胞活力损失较大。

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