课题背景：
当今，在全球不断出现各种重大的安全卫生问题，恶性肿瘤作为其中一种，极大地威胁着人类的健康。据世界卫生组织癌症研究机构(International Agency for Research on Cancer, IARC)报告,全球恶性肿瘤新发病例在2012年已超过1400万,死于恶性肿瘤人数约800万,是世界范围内主要死因。从2010年开始，恶性肿瘤已经成为我国主要公共卫生问题,并且已经超过心脑血管疾病,成为中国人群第一大死因。而随着现代科学技术的发展，我们的生存环境以及生活方式的逐渐转变，恶性肿瘤的发病率和死亡人数只会逐年增加，所以肿瘤的治疗方法需要不断提高。
目前治疗恶性肿瘤主要有外科疗法（手术）、化学疗法（化疗）、放射治疗（放疗）和生物治疗四大模式，外加传统的中医药治疗和现代微创治疗方法。这些方法虽然已有一定的成效，但仍不足以解决现今复杂多变的肿瘤问题，新的治疗方案亟待提出。
在免疫系统中，胸腺扮演者举足轻重的作用。胸腺肽又称胸腺激素或胸腺素，由胸腺上皮细胞产生。其作为多肽激素，具有促进淋巴细胞分化、成熟和增加免疫活性等重要作用。从1990年至今，世界各国生物学家已在胸腺中相继发现许多种激素样功能的提取物，其中研究最清楚的就是胸腺素第五组分（TF5）中的胸腺素alpha;1(Talpha;1)。Talpha;1是一种天然存在的28个氨基酸组成的多肽激素[1] ,可以通过作用于递呈细胞上的TLR（Toll 样受体）[2]，刺激T细胞的分化，促进细胞因子的分泌，如IL-2（白介素2） [3]，还可以与人血清白蛋白[4]以及透明质酸[5]相结合，在世界范围内被用作乙肝[6]、免疫缺陷[7]、恶性肿瘤[8, 9]和HIV/AIDS[10]的免疫调节剂。另外，Talpha;1还是一种潜力的强效囊性纤维化治疗剂[11]。因此，Talpha;1的活性研究对于肿瘤治疗方案的改进具有重大的意义。
正常人血清中IgG依据其重链不同,可分为IgG1、IgG2、IgG3、IgG4个亚类，其中IgG1的Fc片段由重链C端1/2组成，包含CH2和CH3两个功能区，分子量为50KD。Fc片段通过与其受体FcRn的结合，使其免受溶酶体降解[12, 13]。IgG2与IgG3因半衰期短，以及无靶向性的ADCC与CDC作用对正常细胞的损伤，很少被用于免疫融合蛋白的制备。市售的IgG4融合蛋白，如胰高血糖素样肽-1 (GLP-1)[14]，不仅较好的生物动力学性质，其生物学功能也大为提高。
pET32a质粒载体可实现大部分融合基因的可溶表达，且采用原核生物大肠杆菌来表达该蛋白，不仅简化了操作，也较为节省资金[15]。本研究主要是对导入到大肠杆菌的含有Talpha;1-Fc(IgG4)融合基因pET32a质粒诱导表达，融合基因中的His-6可以与镍离子相结合，而咪唑又竞争性结合镍离子，运用该方法分离纯化融合蛋白，脱盐冻干成粉。构建黑色素瘤模型，对肿瘤小鼠进行给药，病理学检查与监测，观察胸腺肽融合蛋白的体内抗肿瘤活性。（黑色素瘤B16细胞株是生长在C57BL/6小鼠耳根部皮肤的自发性肿瘤，此瘤株主要发生肺转移）
实验步骤：
1. 获得重组Talpha;1-Fc融合蛋白
1.1菌种复苏活化
配置LB培养基。在30mL的LB培养基中加入30mu;L浓度为50mg/L的氨苄（Amp）。从-78℃冰箱中取出含有pET32a质粒载体的BL21大肠杆菌菌种，用接种环挑取部分菌体接入培养液中培养。设置摇床参数为37摄氏度、200rpm，放置培养12-14个小时。
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