基于基因检测的蛇类中药饮片快速真伪鉴别方法的建立文献综述

 2023-01-05 06:01

一、课题研究背景

蛇类中药饮片是动物类药材的主要组成部分，有祛风、通络、止痉的功效，主要用于治疗风湿顽痹、麻木拘挛、中风口眼喁斜、半身不遂、抽搐痉挛、破伤风、麻风、疥癣等。目前，《中国药典》2010版共收载了3种蛇类药材，分别为乌梢蛇Zoacys dhumnades、蕲蛇Deinagkistrodon acutus和金钱白花蛇Bungarus multicinctus。近年来，由于野生动植物资源匮乏，且蛇类中药饮片价格昂贵，市场上出现了不少其伪品和混淆品。随着分子生物学的发展，药典中已采用聚合酶链式反应（PCR）法对乌梢蛇和蕲蛇进行鉴别，从遗传物质DNA角度可以在本质上区分中药饮片混伪品，但在实际工作中发现，PCR法易发生非特异性扩增，且电泳检测易导致扩增产物的滞后污染，由此产生假阳性结果。因此，本课题拟采用核酸侵入反应建立一种快速、准确、无污染的蛇类中药饮片鉴别方法。

二、目前常用于物种鉴定的分子生物学方法

国内外采用分子生物学方法鉴别来源于近缘物种的中药饮片常用的技术主要有RFLP（restriction fragment length polymorphism，限制性片段长度多态性）、RAPD（random amplified polymorphism DNA，随机扩增多态DNA）、SSR（simple sequence repeat，微卫星）、AFLP（amplified fragment length polymorphism，扩增片段长度多态性）等。

1. 限制性片段长度多态性RFLP

该技术是利用限制性内切酶能识别DNA分子的特异序列，并在特定序列处切开DNA分子，即产生限制性片段的特性，对于不同种群的生物个体而言，他们的DNA序列存在差别。如果这种差别刚好发生在内切酶的酶切位点，并使内切酶识别序列变成了不能识别序列或是这种差别使本来不是内切酶识别位点的DNA序列变成了内切酶识别位点。这样就导致了用限制性内切酶酶切该DNA序列时，就会少一个或多一个酶切位点，结果产生少一个或多一个的酶切片段。这样就形成了用同一种限制性内切酶切割不同物种DNA序列时，产生不同长度大小、不同数量的限制性酶切片段。后将这些片段电泳、转膜、变性，与标记过的探针进行杂交，洗膜，即可分析其多态性结果。

2. 随机扩增多态DNA RAPD

RAPD 技术是1990 年发明并发展起来的，RAPD是建立在PCR (Polymerase Chain Reaction)基础之上的一种可对整个未知序列的基因组进行多态性分析的分子技术。其以基因组DNA为模板， 以单个人工合成的随机多态核苷酸序列( 通常为10 个碱基对) 为引物，在热稳定的DNA 聚合酶( Taq 酶) 作用下，进行PCR 扩增。该技术是通过分析DNA的PCR产物的多态性来推测生物体内基因排布与外在性状表现的规律的技术。RAPD技术是以8-lObp的随机寡核苷酸片段作为引物，对基因组进行PCR扩增，扩增产物通过琼脂糖凝胶电泳或PAGE电泳检测，研究DNA的多态性。

3. 微卫星SSR

微卫星DNA：重复单位序列最短，只有2～6bp，串联成簇，长度50～100bp，又称为短串联重复序列（Short Tandem Repeat STR) 或简单重复序列（simplesequencerepeats,SSR）。广泛分布于基因组中。

剩余内容已隐藏，您需要先支付 10元 才能查看该篇文章全部内容！立即支付

免费ai写开题、写任务书： 免费Ai开题 | 免费Ai任务书 | 降AI率 | 降重复率 | 论文一键排版

您可能感兴趣的文章