从低清洁度环境迁往高清洁度环境对成年小鼠肠道微生物的影响文献综述

1. 文献综述（或调研报告）：

斯特拉坎于1989年提出了一个合理的能够折中“过敏发病率在小型家庭和西方国家都偏高”的假设——卫生假说。比如，一个出生在小型家庭中的婴儿会在其幼儿时期被充分的保护，原理感染的伤害。而后，Th1/Th2就被添加到这个理论中去：早期的感染会预防人体对环境中的抗原过敏，因为感染会刺激TH1型细胞 T细胞的增值，而T细胞会产生干扰素（IL）-2和干扰素gamma;（IFN-gamma;）。TH2型的T细胞与的这些细胞作用相反，TH2型的细胞产生IL-4和IL-5，这2种细胞因子在过敏的发病机理中非常重要。IL-4对很多免疫球蛋白的成熟是必须的，尤其是IgE，IL-5是嗜酸性粒细胞的产生和成熟因子。

免疫反应分成两大类路径，THL和TH2反应，可能有时有用，但多是多面免疫系统。有四个特定抗体同种型（IgM、IgG、IgA和IgE），其中IgG有四个亚类（igg1，igg2，igg3和igg4）以及iga的两个子类（iga1和IgA2）。每种物质的生产可能需要一个特殊的组合激活细胞和细胞因子。

免疫学研究表明,湿疹的发病可能与Ⅰ型速发型和Ⅳ型迟发型变态反应有关,湿疹患者的细胞免疫功能失调,体液免疫也有显著异常。在Ⅰ型变态反应中,由于机体接触变应原如尘螨、花粉等致敏物质,刺激机体表皮的朗格罕细胞(LCs),朗格罕细胞具有高亲和力的IgE受体,产生IgE抗体,并吸附在细胞表面,使机体处于致敏状态,当抗原再一次进入机体后,与细胞表面的IgE抗体结合,发生Ⅰ型变态反应,从而引起湿疹样皮肤损害。在Ⅳ型迟发型变态反应中,T细胞受到抗原刺激后转化为致敏的淋巴细胞,产生临床症状。致敏的T细胞主要有CD4 和CD8 两个亚群,分别称为辅助性T细胞和抑制性T细胞。CD4 T细胞与相应变应原再次接触时,细胞活化释放出一系列淋巴因子,而CD8 细胞则能直接杀伤携带有变应原的靶细胞。各种炎症细胞和活化因子共同引起血管扩张,血管壁的通透性增强,从而形成皮肤湿疹样改变。杨西群等通过测定皮炎湿疹患者外周血PBMC培养上清液中细胞因子的水平,发现Th1/ Th2细胞因子之间平衡异常,PB-MC分泌的IL-4和IL-l0水平在皮炎湿疹组与正常对照组之间有统计学意义

有研究认为，在现代西方国家过度卫生的生活方式，不是限制病毒或细菌感染，而是改变了正常婴儿肠道定植模式，以及这导致无法诱导和维持口腔对食品蛋白、吸入抗原等无害抗原的耐受性。耐受性一般是由抗原催化，所谓的口腔耐受性，或粘膜公差。经肠外免疫后，耐受性动物或人不会对T细胞活化或抗体产生反应抗原。Th1细胞比Th2细胞更容易耐受，但两者都可能受到口腔耐受的诱导。保持对某些抗原的耐受状态是免疫系统对其他抗原的免疫应答同样重要的任务。如果没有这个机制，我们会对自己的反应很强烈。组织以及对食物蛋白等无害抗原就会使机体产生炎症和过敏状态。

有研究表明低清洁度环境降低抗生素对肠道菌群丰富度的影响，且清洁度较低环境下的两组小鼠在抗生素停药后的9天时间里恢复速度很快，在抗生素停药第3天就已经出现明显的恢复趋势，而且在第9天已经基本接近抗生素处理前的水平；相比之下，较高环境清洁度条件下吃正常饲料的2组小鼠在抗生素停药的第9天仍处在很低的水平，抗生素停药后的9天时间里没有出现恢复迹象。以此为我们得出结论：低环境清洁度能够降低抗生素对肠道菌群丰富度的影响。

一般来说，成年后小鼠的肠道微生态会随着环境、饮食等因素而改变，我们推测环境清洁度单一因素能够影响成年小鼠肠道微生态，故设计实验来验证我们的推测。

1. 方案（设计方案、或研究方案、研制方案）论证：
2. 选取30只C57实验小鼠，随机分为3组：XZ、SPF、SPFL组。小鼠8周龄前放在普通的动物房中饲养，引用自来水，食用无菌饲料，垫料为，正常垫料加地表土。
3. 在8周龄时，采集三组小鼠的粪便样本，XZ组照常饲养；将SPF、SPFL组移往SPF级动物房饲养，引用无菌水、无菌饲料，且SPF组为正常垫料，SPFL组为漏粪网；
4. 在迁移后的第7天、第21天对三组小鼠进行粪便样品收集；
5. 对三组小鼠的90个样本做高通量测序，并分析数据。

1. 进度安排：

2018.11.1-2019.03.01 阅读大量文献

2019.03.01-2019.04.20 完成实验，采集数据，并分析数据

2019.04.20-2019.5.31 完成论文写作与论文答辩工作