阔叶十大功劳叶斑病病原菌的分离与鉴定
1 前言
1.1 阔叶十大功劳概述
1.1.1 阔叶十大功劳生物学特性
阔叶十大功劳(Mahonia bealei (Fort.) Carr.)俗名为大叶黄柏、土黄柏、老鼠刺儿等，为小檗科(Bebreridaeeae)十大功劳属的常绿灌木植物[1]。植株有时可以高达4 m左右，奇数羽状复叶，叶片多聚生于植株的枝顶，叶互生，小叶多对生，叶片多呈厚革质、较坚硬，长25-40 cm；顶生小叶较大，有叶柄呈长椭圆形，侧生小叶7-15片，无叶柄且基部歪斜；叶面浅绿色至深绿色并带有光泽。夏、秋开花，总状花序，花香、黄色。蓝色浆果近球形，外形似蓝莓，被1层白色果粉包裹[2][3]。
原产我国，且分布较广，达12个省市自治区[4],其中华南一带的十大功劳属资源最为丰富[5]；它多分布于林下和灌丛中，属于阴性植物，喜欢温暖湿润的环境，较耐寒，但不耐热，强光环境会灼伤新叶[6]。
1.1.2 阔叶十大功劳的价值
1.1.2.1 阔叶十大功劳的观赏价值
阔叶十大功劳具有极好的耐阴性，因此在园林绿化和景观设计中，常它用作为高大植物的下层点缀。它四季常绿、枝叶茂盛，在旅游区内密植成行形成绿篱，可以作为一个障碍物，将游客引向正确的旅游路线。它的叶也被广泛应用于道路、草坪、花坛、池畔作点缀，是重要的园林观赏植物[7]。同时，它还有很多变种，比如无刺和密刺阔叶十大功劳等，因其叶片较大，且新枝柔韧性好不易折断，利于加工制作成不同形式的盆景[3][8]。
1.1.2.2 阔叶十大功劳的药用价值
目前《中国药典》中，记载最多的是对阔叶十大功劳的研究，其药用价值受到了广泛关注，是一种很有价值的中药材树种[9]；同时现代研究还表明它具有抑菌[10]、抗炎[11]和抗氧化[12][13][14]等活性。其全株均可入药，主要以根、茎、叶入药居多。
早在上世纪70年代，有学者已从其根茎提取到小蘖碱等活性成分[15]。1994年Mccutcheon等[16]证实了从根中分离的提取物对真菌有抑制作用；接着，Cernakova等[17]则发现分离得到的小檗碱对17种细菌也有抑制作用。但最新的研究中，蔡嘉慧等[18]以阔叶十大功劳叶为原料，结果表明叶提取物对抑制真菌有明显效果，但对细菌没有效果。随后，曾祥英等把从根中提取的生物碱去对抗体外流感病毒，发现具有良好的抑制作用[19]；已有学者研究结果显示小檗生物活性碱能抑制多种瘤细胞的生长和扩散，如人的白血病细胞、骨髓瘤细胞、肝癌细胞等[20][21][22][23]。
同时，阔叶十大功劳的叶有滋阴、清热、止咳、除痰等功效。最新研究中，杨昌贵等学者建立了一套用于十大功劳叶药材的质量标准，便于评价药材的优劣[24]；蒲忠慧等人则优化了从叶片提取小檗碱的工艺[25]。目前，研究热点主要在该属植物新种的确定和资源植物地理分布情况，以及分析根茎叶提取物的化学成分和生物制药的活性等。至今，从十大功劳植物中已分离、鉴定出了碱类、酸类和挥发油状物等多种化合物；但在形态解剖生理生态特征、栽培和繁殖技术以及病虫害防治方面的研究很少[26]。该植物拥有着丰富的药用资源，但病虫害对它的危害，造成了一定的经济损失和利用价值减弱。
1.1.3 阔叶十大功劳相关病害的研究概述
近年来，在国内阔叶十大功劳中已发现的病害有阔叶十大功劳炭疽病、斑点病、白粉病、叶斑病、锈病等[27]，其中白粉病和炭疽病的病原菌鉴定及发病规律已有学者相继报道。十大功劳属植物发生危害最严重的真菌性病害是白粉病，也是该属植物病虫害防治的重点。耿晓东[28]研究发现白粉病在寄主植物狭叶十大功劳上的发生具有季节性，早春和晚秋为发病高峰期。2007年，赵桂华[29]等首次描述该病的致病菌为亚麻粉孢(Oidiumlini Skoric)。随后，张林燕[30]等在此基础上对该病原菌开展了化学药剂的筛选试验，结果表明发病初在叶面喷洒烯唑醇和氟硅唑药剂可以有效防治该病发生。而周定瑞[31]、余雯雯[32]等人则通过对该属植物白粉病的病原菌和发生规律进一步深入研究后，提出了有效防治该病的方法和建议。最新报道中我国浙江慈溪地区也发生了十大功劳的白粉病，且秋季发病率高达98%[33]。
炭疽病的研究进展:2010年，谭海文[34]等明确Colletotrichum gloeosporioides是引起阔叶十大功劳炭疽病的致病菌；随后，他又通过改变病原菌的温湿度、pH、营养源等对阔叶十大功劳炭疽菌的生物学特性开展研究，为该病的的防治提供了理论依据[35]。最近几年的研究中，李沛利[36]报道了狭叶十大功劳炭疽病的病原菌为果生炭疽菌(Colletotrichum fructicola），其结果与报道过同属的阔叶十大功劳炭疽病病原不尽相同。在国外，Wang M首次报道了在人工接种条件下，亮叶十大功劳还能作为小麦条锈病的转主寄主[37]。
2 植物病原真菌的分离与致病性测定
2.1 植物病原真菌的分离
植物病原真菌的分离，即把所需的病原菌从宿主或其它杂菌分离出来，供给合适的条件，实现纯培养。由于植物病原真菌种类繁多，因此分离纯化方法也不尽相同，而同种材料也可以用不同的方法分离。其中最常用的分离方法是组织分离法和单孢分离法[38]。
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