一、课题的研究背景、意义和目的
课题研究的背景: 随着生物技术的发展，已有大量蛋白多肽类药物进入市场。虽然蛋白药物在细胞水平和胞外生理系统水平疾病治疗机制中有着无可替代的优势，但蛋白质在分子性质上其实并不是理想的药物候选物。首先，作为功能和结构高度相关的复杂大分子，蛋白质药物稳定性较差，如容易形成蛋白聚体、氨基酸侧链异质化、可溶性低等，使其生产和贮存难度很大；其次，蛋白药物容易通过各种清除途径被人体内的蛋白酶降解，包括血液中的蛋白水解酶，肝脏细胞的内吞消除，肾小球滤过等，并最终导致其体内半衰期较短，为了维持其疗效临床应用中需要频繁给药，患者的依从性较差；再者，所有的蛋白药物对于病人来说都有潜在的免疫原性问题，抗体的产生是一个主要的安全性问题，并导致药效的降低。由于很多以延长药物半衰期为目的的策略，同时能够提高蛋白药物稳定性并减少免疫原性。因此，通过蛋白优化设计和工程改造获得长效蛋白药物是提高重组蛋白成药性的重要策略，已成为当今蛋白新药研发的重点方向和高热度领域，但与此同时蛋白质类药物研发的成功率也一直很低，建立一个有效的早期成药性评价方法，如评价候选蛋白分子在体内的稳定性，尤其是以糖蛋白类药物为代表的内吞消除途径，可以为提高药物研发成功率提供很大的帮助。
去唾液酸糖蛋白受体（ASGPR）和甘露糖蛋白受体（MR）分别是肝脏细胞和巨噬细胞表面的一种介导糖蛋白类分子内吞清除的受体分子。ASGPR 能够介导去唾液酸化的糖蛋白被肝细胞内吞降解。对ASGPR介导的内吞作用的研究极大地促进并加深了人们对于细胞内体囊及胞内膜转运的认识和理解。目前已知的ASGPR的配体非常多，提示其在糖蛋白代谢、脂代谢、凋亡细胞降解、调节凝血、介导病毒进入细胞和自身免疫性炎症反应等多个生理环节均发挥着重要的作用。
甘露糖蛋白受体属于C型凝集素超家族成员，是Ⅰ型跨膜受体,其肽链从N端到C端依次为:N 末端富含半胱氨酸区域、单个Ⅱ型纤维连接蛋白(FN Ⅱ)区域、8~10个C型凝集素样区域( CTLDs) 和细胞质区域。MR能够介导体内高甘露糖残基覆盖的细菌，蛋白质等清除，而这个清除过程多由巨噬细胞等单核细胞进行。
课题研究的意义和目的：本课题研究糖蛋白类药物在体内清除中的一个重要途径，即由ASGPR和MR介导的内吞消除过程。选定去唾液酸胎球蛋白和核糖核酸酶B为工具蛋白，通过荧光标记工具蛋白质，定性定量分析内吞进入细胞的蛋白质荧光强度，检测糖受体介导的内吞途径的发生，用于与糖蛋白受体内吞相关的蛋白质分子早期成药性的评价和研究，为后期蛋白质工程类药物的长效性改造提供方法学依据。
二、课题研究的主要内容
1. 去唾液酸胎球蛋白的FITC标记
1.1 去唾液酸胎球蛋白浓度的测定，包括BCA测定和A280测定，计算
1.2 碱性条件下过量FITC标记去唾液酸胎球蛋白（ASF分子量为38KD，FITC浓度为4mg/mL，标记摩尔比为20:1)
1.3 透析去除过量游离的FITC，并更换标记缓冲液为PBS
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