全长和截短原癌蛋白SET及其二聚体的克隆、表达与纯化
一、研究问题
SET/TAF-Ibeta;/I2PP2A蛋白（下文简称为SET蛋白）在构建真核表达系统（毕赤酵母）中表达时SET蛋白被严重切割，因此考虑使用大肠杆菌pET-28a原核表达系统表达SET蛋白。
本实验准备在构建能够表达带有his-tag组氨酸标签的目的蛋白的重组基因工程载体，采用镍柱蛋白纯化的方法纯化目的蛋白。
SET-trucated蛋白是SET蛋白真核表达时发现的未知蛋白，能够与SET蛋白形成二聚体，经过研究发现表达SET-truncated蛋白的基因序列是SET蛋白基因序列的片段，因此暂时命名为SET-truncated蛋白。
为进一步验证SET蛋白的各项功能是否与SET-truncated以及二者形成的二聚体有关，本实验主要目的在于完成SET/TAF-Ibeta;/I2PP2A、SET-truncated以及二者形成的二聚体的克隆、表达、纯化。
二、研究手段
1.质粒抽提：在含有卡那霉素的LB培养基中接种含pET28a质粒的菌株，置于37℃，200r/min的摇床培养箱中过夜培养12-16h，通过小量质粒提取试剂盒完成质粒抽提，将所得质粒DNA溶液置于20℃保存或用于后续实验。质粒抽提完成后将质粒DNA通过琼脂糖凝胶电泳检查分子量大小是否与预期相符合。
2.引物设计：根据之前实验成功表达的SET蛋白基因序列、SET-truncated蛋白基因序列，以及pET-28a载体多克隆位点特点选取酶切位点，设计较为合适的上游引物、下游引物使目的蛋白能够正常表达并且带有his-tag组氨酸标签与选定的酶切位点基因序列，便于表达后蛋白的纯化。
3.PCR扩增目的基因片段
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