文献综述
1.国内外研究现状界发展趋势：
IHHNV又称慢性矮小残缺综合征(RDS)，其病原为传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)［1］。IHHNV是养殖对虾的主要病毒病之一，该病传播速度快，感染率高，是国际兽医局划定的必须向其申报的重要疾病［2］。IHHNV是已知最小的对虾病毒，它被分类为细小病毒科(Parvoviridae)、浓核病毒亚科(Densovirinae, DNVs)、短浓核病毒属(Brevidensovirus)。病毒粒子没有囊膜包被，DNA为线性单链DNA，大小约为3.9 kb［3］。IHHNV基因型可以分为感染型和非感染型。感染型包括Ⅰ型和Ⅱ型，Ⅰ型主要分布于美国和东亚；Ⅱ型主要分布于东南亚。非感染型包括Ⅲ型和Ⅳ型，Ⅲ型又称3A 型，主要分布于马达加斯加和澳大利亚；Ⅳ型又称 3B型，主要分布于坦桑尼亚和莫桑比克。IHHNV基因组包含3个 ORF，分别为ORF1、ORF2和ORF3。有研究显示我国凡纳滨对虾患IHHNV病毒病的原因为感染了IHHNV韩国株的甲壳类动物洄游繁殖，在高密度的养殖环境中，通过水平传播的方式将病毒传给了养殖南美白对虾［4］。IHHNV主要感染的靶器官是易感虾类的表皮、腮、肠道、造血器官、肌肉等，主要的靶细胞为上皮细胞、肌细胞等，光学显微镜下观察发现，被感染的细胞核内有嗜酸性被染成红色的呈晶体状排列的包涵体[5]。由于对虾特殊的免疫机制，疫苗治疗效果差，针对IHHNV的特效药物少，因此预防是健康养殖的关键［6］。
彭敏等通过酵母双杂交技术构建载体pGBKT7-CP，pG-BKT7-NS1，pG-BKT7-NS2，并对其进行自激活检测和毒性检测，结果证明成功构建IHHNV3个蛋白的诱饵载体［7］。王筱姗等通过用病毒覆盖蛋白印迹技术(VOPBA)和免疫共沉淀技术验证了IHHNV 的衣壳蛋白可以与对虾鳃细胞膜NM23蛋白相互作用，推测IHHNV CP与细胞膜上NM23蛋白结合后, 通过某种偶联机制使细胞骨架发生了改变, 从而促进宿主细胞内吞病毒粒子, 因此NM23可能介导 IHHNV的细胞入侵［8］。陈沈雪对IHHNV各编码蛋白间的相互作用进行研究，得到IHHNV的结构蛋白CP与非结构蛋白间NS1、NS2或者非结构蛋白NS1与NS2间不存在异型相互作用, 而只有病毒的结构蛋白CP存在同型相互作用，证明了CP的自身互作是高度敏感的, 任何较少氨基酸序列的截短将导致其自身互作的丧失［9］。IHHNV病毒与其他细小病毒一样，不编码DNA聚合酶，依靠宿主细胞进行DNA复制和增殖，因此，它们需要宿主迅速增殖的细胞来满足自身复制的需要，导致幼虾比成虾更容易感染，因为其体内有活跃的分裂细胞［10］。有研究证明IHHNV病毒与其他病毒的交叉作用。杨冰等采用OIE的Real-time PCR检测IHHNV，在体系优化后进行检测，其检测灵敏度明显提高，通过此方法研究得出：IHHNV与EHP同时感染时，其病毒载量存在一定的相关性，即体长相对较小 的个体EHP载量较IHHNV偏高，而体长较大则反之［11］。胡文娟等在IHHNV-WSSV共感染研究中发现，存在IHHNV病毒的组别相对于其他实验组可在一定程度上激发更早、更高一些的免疫应答。其次，IHHNV组对虾肝胰腺和肌肉中两种酶的活性在感染过程中一直较为稳定，并始终高于同期控制组，单纯IHHNV感染对对虾表现为长期低水平的免疫激活［12］。张娜采用荧光 PCR 检测病毒量的结果得出，预感染IHHNV再用WSSV攻毒，存活虾体内的IHHNV含量比死亡虾高［13］。于衬等设计制备载体pEASY-T1以及pET-capsid进行基因测序后显示与IHHNV衣壳蛋白极高的同源性，制备出针对对虾IHHNV病毒衣壳蛋白的多克隆抗体［14］。尹晓彤等通过VOPBA 结合HIS PULL-DOWN方法, 筛选IHHNV衣壳蛋白 (CP)的其中4种受体蛋白，分别是：信号转导与转录激活因子(STAT)、热休克蛋白90 (HSP90)、酚氧化酶原2型(proPO- 2)、Na /K -ATP酶alpha;亚基，参与IHHNV入侵以及细胞病变的发生，STAT也能与IHHNV CP结合, 通过 STAT 产生干扰素非特异性免疫, 防御病毒入侵［15］。李秋璇克隆了990bp的IHHNV-Nj株ORF3基因，对其进行编码蛋白序列分析和原核表达，构建pET32a-ORF3重组表达载体,为IHHNV病毒的检测提供材料［16］。焦雪等采用race-PCR方法，成功扩增出 IHHNV 全基因组序列。包含6个ORF，分别为核衣壳蛋白( N) 、磷蛋白 ( P) 、基质蛋白( M) 、糖蛋白( G) 、独特的非病毒结构蛋白( NV) 及病毒聚合酶蛋白( L) 。G蛋白是传染性造血器官坏死病病毒编码抗原决定簇的主要蛋白，能刺激机体产生中和抗体［17］。侯璐红究通过在IHHNV病毒衣壳蛋白CP的N端融合表达荧光蛋白EGFP，发现EGFP的插入不影响CP蛋白的折叠和组装及VLP的抗原特性，通过原核表达构建IHHNV的荧光病毒样颗粒［18］。将IHHNV的衣壳蛋白基因重组表达，形成病毒样颗粒（VLPs），再通过亲和层析将其纯化出来［19］。徐淑菲采用LAMP方法，即环介导等温扩增技术，建立了对IHHNV病毒进行快速高效的检测方法，现场诊断可使用该方法［20］。
2.本课题研究的意义和价值：
对IHHNV检测方法的研究，目前国内存在多种分子生物学方法，如：聚合酶链式反应（PCR）核酸分子杂交，微列阵检测以及环介导等温扩增技术，为南美白对虾亲虾以及苗种的IHHNV流行病学检测提供可靠便捷的手段。通过基因扩增和重组质粒的构建，研究南美白对虾对抗IHHNV病毒的机体免疫过程，为预防和控制病害的发生提供参考数据。其次，通过一些诊断方法研究IHHNV对南美白对虾虾苗的致病机理，为养殖对虾提高存活率提供建议。
3.参考文献：
［1］Kalagayan H，Godin D，Kanna R，et al．IHHN virus as an etiological factor in runt-deformity syndrome (RDS) of juvenile Penaeus vannamei cultured in Hawaii ［J］.Journal of the World Aquaculture Society，2016，22(4):235－243
［2］ Lightner D V．Virus diseases of farmed shrimp in the Western Hemisphere (the Americas):A review［J］.Journal of Invertebrate Pathology，2017，106(1):110－130
［3］Bonami J R,Trumper B,Mari J,et al.Purification and characterization of the infectious hypodermal and haematopoietic necrosis virus of penaeid shrimps［J］.Journal of the General Virology,2015,71:2657-2664
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