拟研究或解决的问题：
本课题拟考察四氢小檗红碱(Tetrahydroberberrubine , THB)能否有效改善脂多糖（lipopolysaccharide , LPS）诱导THP-1细胞中的炎性反应，并初步探讨其可能的作用机制，为四氢小檗红碱抗炎提供一定的实验参考依据。
采用的研究手段：
（1）THP-1 细胞培养
人外周血单核细胞株（THP-1），购自中科院上海细胞所。以含 10%胎牛血清的 RPMI 1640 培养基在 37 ℃，5% CO2 条件下培养。当细胞密度达到 8105 /mL时，进行传代培养（离心法），即以 1000 rpm，离心 5 min，弃掉上清，沉淀用新鲜的 10% 1640 培养基以 2105 /mL的密度传代接种。
（2）酶联免疫吸附法(ELISA)法测定TNF-alpha;和NO含量
将 THP-1 细胞用 10% 1640 培养基悬浮，以1106 /mL的细胞密度接种6孔培养板（2 mL/孔），37 ℃、5 % CO2培养过夜。将10 % 1640培养基小心吸出，加入无血清的1640培养基（800 mu;L/孔），同步化1 h；实验分组：① 空白对照组：先加入100 mu;L 的 0.1% DMSO 溶液（溶媒） 1 h，再加入 100 mu;L 1640 培养基；② 模型组：先加入100 mu;L 的 0.1% DMSO 溶液（溶媒） 1 h，再加入 100 mu;L 细菌内毒素（ LPS，终浓度为 500 ng/mL）孵育 30min；③ 给药组：先加入 100 mu;L 不同浓度药物作用 1 h，再加入 100 mu;L LPS （500 ng/mL），共同孵育 30 min。收集细胞，4℃ 3000r/min 离心5分钟，取上清用一氧化氮ELISA试剂盒检测NO含量。沉淀用冷PBS复溶，4℃ 3000r/min 离心5分钟，弃上清；沉淀用1mL冷PBS复溶，超声破碎细胞，得到裂解液用TNF-alpha;ELISA试剂盒检测TNF-alpha;含量。
THB先溶于纯DMSO中，配成浓度为100mmol/L的高浓度母液，然后在临用前以RPMI 1640培养基稀释到所需浓度，DMSO的最终体积分数均为0.1 %。
（3）Western blot 检测TF及NF-kB、MAPK和PI3K/Akt信号通路相关蛋白的表达及磷酸化
等量加入细胞裂解液后，提取THP-1细胞的蛋白，4℃裂解30 min。离心去上清液。用BCA蛋白试剂盒测定蛋白质的含量。之后剩余的裂解液按1/5的体积加入loading buffer煮蛋白。再用10% SDSPAGE分离样品蛋白并转移到PVDF膜，膜由3%牛血清白蛋白(BSA)封闭并且由初级抗体(TF、NF-kB、MAPK和PI3K/Akt)孵化过夜。然后由山羊、兔、鼠的抗体结合辣根过氧化物酶作为次级抗体孵化2 h。免疫反应带由化学发光系统(ECLplus , Chemi DoxTM XRS﹢)检测。结果用Image Lab凝胶图像分析系统对蛋白条带进行分析，以对照组的面积灰度值为100%与实验组进行比较和半定量分析。
