生脉散出自《医学启源》,由人参,麦冬,五味子三味药组成,具有益气复脉、养阴生津、敛肺止汗等功效,临床应用十分广泛,国内外学者对生脉散防治心脑血管疾病进行了大量的研究,证实该方对脑氧化损伤具有显著的改善作用,有利于神经退行性疾病的治疗。
课题组前期经筛选发现生脉散相关的4个有效成分按一定比例组合,可明显改善脑缺血缺氧损伤,已获专利授权。
本课题拟研究该有效成分组合对过氧化氢诱导的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12 cell)氧化应激模型的影响,为该组方应用于氧化应激相关疾病提供参考依据。
采用的研究手段: 运用过氧化氢诱导的PC12细胞的氧化应激模型考察细胞的损伤及药物的有效性。
采用MTT法:考察长时程12小时不同浓度的过氧化氢刺激下细胞的损伤情况,选取损伤程度适宜的浓度条件进行后续的药物有效性考察实验。
考察不同浓度的生脉散新组方对PC12细胞的毒性作用,以确定组方在实验所需浓度范围内对细胞不会产生任何的损伤。
考察在上述所得的适宜过氧化氢浓度损伤范围内,适宜的药物浓度对损伤细胞是否具有保护作用,并呈现一定的浓度依赖性。
采用倒置荧光显微镜:1.观察经过氧化氢损伤后,细胞内活性氧ROS含量,组方是否能够剂量依赖性地降低胞内ROS的水平。
2.DNA染料(hochest33342)染色考察细胞凋亡的情况,观察模型组细胞核是否存在致密浓染或碎块状致密浓染的蓝色荧光,组方对其是否具有一定的改善作用。
采用蛋白免疫印迹(western bolt)技术:1.考察凋亡相关蛋白Casepase3及其活化的cleaved-Casepase3的表达情况,损伤组Casepase3表达是否降低,其活化型表达是否升高,给药组是否能够有所改善。
剩余内容已隐藏,您需要先支付 10元 才能查看该篇文章全部内容!立即支付
