开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）
- 选题背景及课题拟研究的问题
骨骼是人体内重要的组织，由骨膜、骨质和骨髓组成。骨髓及骨基质中的许多细胞如成骨细胞、破骨细胞、造血干细胞等及细胞因子共同构成了骨的微环境。成骨细胞是从间充质干细胞终末分化的单核细胞，通过产生新的细胞外基质和磷酸钙晶体沉积到基质的间隙中参与骨形成。破骨细胞是由单核巨噬细胞谱的前体细胞产生的多核细胞，通过产生酸溶解磷酸钙晶体并通过分泌蛋白酶降解暴露的细胞外基质参与骨吸收。正常骨骼时刻处于一个骨重建的过程，成骨细胞和破骨细胞通过骨形成和骨吸收之间相互协调，对于保持骨的质量的稳定性及其微观结构的完整性发挥着重要的作用。
许多恶性肿瘤如乳腺癌、前列腺癌、甲状腺癌等常伴有骨转移，骨转移瘤的形成会伴有一系列骨相关事件的发生，如骨痛、脊髓受压、病理性骨折和高钙血症等，严重影响患者的活动能力及生活质量。骨微环境为癌细胞在骨基质内定植、休眠及再活化增殖提供有力的环境。肿瘤转移至骨骼后，成骨细胞激活，骨质溶解并释放大量细胞因子，作用于骨骼基质细胞，激活成骨相关因子，导致成骨性病灶形成。同时，成骨细胞表达的核因子与破骨细胞表面的因子结合使破骨细胞活化。破骨细胞成熟后营造酸性环境，促使骨基质降解，使大量储存于骨内的细胞因子进入骨微环境，进一步促进骨骼细胞的生长和骨质溶解，导致破骨性病灶的形成。
同时，作为高度矿化的组织，骨骼硬度大、渗透性差，血流少，生理生化过程特殊，按照一般的给药途径很难使药物转运到病灶部位。很多药物通常需要全身给药，并提高药物的剂量才能够在骨组织中达到有效的浓度。这样不仅会降低药物的治疗指数，同时会对病人的非骨组织及器官带来毒副作用。
因此，我们根据病灶局部病理生理的特点，利用阿仑膦酸钠对骨的主要成分羟基磷灰石的强亲和力，与低分子量肝素的抗转移作用相结合，拟开发一种阿仑膦酸钠和低分子量肝素修饰的DOX脂质体，将药物最大限度地递送到病灶靶区，提高药物在骨组织中的浓度，用于骨肉瘤的治疗。与传统的化疗治疗骨转移不同，骨靶向给药可以提高治疗效率，避免严重的毒副作用。
二．研究内容
1.骨基质中羟基磷灰石含量高，双膦酸盐类化合物，是天然焦磷酸的类似物，分子中两个含有紧密结合的磷酸根，磷酸根上的氧原子与钙离子发生螯合，对骨组织和钙化组织表现出强亲和力，骨提取率可达到50%-60%，可以与各种药物分子连接成骨靶向药物。同时，选择低分子量肝素作为载体，既可以实现制剂在体内的长循环，提高靶向效果，还可以发挥抗转移作用，使载体与药物发挥协同抗肿瘤作用。
2.阿霉素是治疗早期和晚期乳腺癌应用最广泛的药物之一。首先通过薄膜分散法制备包封DOX的脂质体。然后将LMWH结合在DOX脂质体表面对其进行修饰制成LMWH-DOX脂质体。再通过LMWH的羧基与ALN的氨基反映形成酰胺键生成LMWH-ALN，并通过核磁共振谱验证LMWH-ALN的生成，再对DOX脂质体进行修饰制备ALN-LMWH-DOX脂质体。分别考察制备的脂质体的粒径、多分散指数、zeta电位、包封率及载药量。其中DOX脂质体是阳离子脂质体，其zeta 电位带有正电荷，而LMWH与ALN-LMWH分子中含有许多磺酸根，结合在脂质体表面后会生电荷反转，其zeta电位为负电荷。
将骨肉瘤细胞放入完全培养液中培养，及时传代，向小鼠右后肢皮下接种骨肉瘤细胞悬液，培养一段时间，当肿瘤体积一定大时，可以进行实验。对骨肉瘤小鼠分别静脉注射生理盐水、LMWH、游离阿霉素、DOX脂质体、LMWH-DOX脂质体以及ALN-LMWH-DOX脂质体， 分别对骨肉瘤进行分离观察，切片染色，可以观察到ALN-LMWH-DOX脂质体对骨组织具有明显的靶向性，低分子量肝素还有抗转移的作用，同时游离阿霉素具有明显的心脏毒性，通过制备脂质体可以改善对心脏带来的影响。
三．国内外研究现状（文献综述）目前，国内外对于骨靶向制剂的研究也有一些进展，
