吡咯伯克霍尔德氏菌Burkholderia pyrrociniaJK-SH007启动子筛选
摘要：吡咯伯克霍尔德氏菌JK-SH007是一种具有高效生防价值的菌株，获得不同类型、不同强度的启动子将会为其相关基因研究及工程菌的构建开辟新的研究方法。本研究将以荧光素酶蛋白为报告基因进行启动子探针载体构建，目标构建适用于吡咯伯克霍尔德式菌JK-SH007启动子活性筛选和检测的探针载体，筛选得到高水平转录报告基因的启动子，旨为吡咯伯克霍尔德氏菌启动子的发现、优化改造和利用奠定基础。
关键词:吡咯伯克霍尔德式菌JK-SH007；启动子；载体构建
1 吡咯伯克霍尔德式菌JK-SH007概述
吡咯伯克霍尔德式菌（Burkholderia pyrrocinia，简称B. pyrrocinia）JK-SH007，是由任嘉红等人从杨树栽培区的杨树干部分离纯化出对3种杨树溃疡病病原菌有拮抗作用的对宿主无毒害性，能在宿主杨树体内长期定殖，并具有促生作用的菌株[1]。吡咯伯克霍尔德氏菌在目前的分类地位上隶属于洋葱伯克霍尔德氏菌（B cepacia，简称Bc），B cepacia是一种广泛存在于农业环境和医院的革兰氏阴性细菌，是一组基因型不同表型相近的复合物（Burkholderia cepacia complex ，简称Bcc），现被国际上划分为9个基因型，合称洋葱伯克氏菌群（Bcc）。
目前李浩等人将从杨树体内筛选获得的对杨树溃疡病等林木病害有高效生防潜能的吡咯伯克霍尔德氏菌JK-SH007菌株作为研究对象，开展了该菌株的定殖、促生机理、安全性和发酵优化等与生防相关的研究[2]。何玲敏等人在前人的研究基础上，构建了B. pyrrocinia JK-SH007菌株的工程菌，并研究了相关基因的功能[3]。王小月、窦承阳等人以JK-SH007菌株为研究对象，开展了相关田间试验，并对该株菌的应用性进行了研究。但吡咯伯克霍尔德式菌 JK-SH007基因相关启动子方面尚未得到充分研究。研究拮抗细菌的启动子,能充分发掘有益微生物资源, 进一步探查其抗病机理，为使其防治植物病害的功能得到充分发挥奠定基础。
2 启动子概述
2.1启动子的概念及特征
基因启动子（promoter）是一段位于结构基因5`端上游区的DNA序列,它可以激活RNA聚合酶,使模板DNA与其能够准确的结合并具有转录起始的特异性[4]。启动子是基因表达调控的关键顺式作用元件,其调控模式的实质是启动子与聚合酶以及其它蛋白辅助因子等反式作用元件的相互作用[5]。
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