开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）
多数广谱抗肿瘤药物，如紫杉醇（PTX）、10-羟基喜树碱（HCPT）、槲皮素（QUE）和姜黄素（CUR）等，由于天然的疏水性，溶出速率低，无法发挥其潜在的治疗作用，限制了临床上的应用1,2。纳米结晶（NC），即纳米混悬液3,4，通过减小药物粒径增加表面积提高药物的溶出速率。
在NC的研究领域，采用pH响应型或还原响应型聚合物为稳定剂的文献报道较少，而以PEG化聚合物为稳定剂的研究较多。Fuhrmann等5制备了以聚合物PEG-PCL为稳定剂的PTX NC，其中PEG链段较短，PCL链段较长，连接可交联的化学基团，在PTX NC溶解后，PEG-PCL形成纳米笼结构，为NC提供了不易脱落的稳定剂涂层。考虑其他聚酯也适用于作稳定剂，从而调节纳米材料的降解速率。Zhang等6合成PEG连接紫杉醇聚合物PEG-PTX，并以此为稳定剂制备紫杉醇纳米结晶。与纯药物纳米结晶相比，PEG修饰后表面水化层增加，稳定性及肿瘤抑制作用均明显提高。
最近的研究证实NO供体或载体可诱导肿瘤细胞凋亡，有多种抗肿瘤机制，如释放肿瘤组织氧化分压提高化疗药物的氧化作用，调节DNA修复能力，抑制药物泵出相关蛋白，诱导耐药肿瘤细胞内GSH消耗提高抗肿瘤药物的杀伤作用等7,8。NO是一种活性氮，能诱导参与DNA修复的几种蛋白质发生亚硝基化和变性，降低DNA修复能力，增加作用于转录或复制相关DNA的抗肿瘤药物的细胞毒性9,10。Lo Bello等提出NO可增加阿霉素（DOX）与核酸的结合，从而增加抗肿瘤疗效。在GSH及谷胱甘肽S-转移酶P1-1（GSTP1-1）高表达的耐药MCF-7细胞中，S-亚硝基谷胱甘肽（GSNO）处理后，共聚焦显微镜观察到DOX主要在细胞核聚集11。NO可抑制缺氧诱导因子（HIF）的激活，该因子在厌氧条件下调节基因转录并诱导MDR12,13。NO也可通过NF-kappa;B相关途径调节肿瘤细胞对化疗的敏感性，NF-kappa;B不仅调节肿瘤生存和转移途径，还调节耐药性14。Song等将FDA批准的TPGS亲水端PEG修改为释放NO的硝酸酯（-ONO2）15，在水中自组装形成胶束。在高浓度GSH条件下及HepG2细胞中，由于硝酸酯的氧化还原响应性快速释放NO，释放的NO可诱导细胞毒性，且在体外增强肿瘤细胞对DOX摄取。
综合以上研究背景，本课题设计合成新型聚合物聚乙二醇-聚硝酸酯碳酸酯（PEG-PNEC）为稳定剂，采用Bottom-up反溶剂沉淀法制备对肿瘤微环境响应的NC。聚合物PNEC片段较长，可响应细胞质高水平GSH，结构中硝酸酯分解释放NO，通过多种机制如释放肿瘤组织氧化分压、调节DNA修复能力、抑制药物泵出相关蛋白等，逆转肿瘤多药耐药。同时在肿瘤细胞质瞬间富集高浓度药物，递送药物至肿瘤细胞核，可减小注射剂量，降低毒副作用。制备的NC通过多种肿瘤细胞如A549、HeLa、MCF-7和S180来验证抗肿瘤活性。利用体内的生物响应性因素，构建肿瘤微环境响应型纳米递药载体，实现药物定位释放，将为肿瘤治疗开拓新的思路，有望达到安全有效的肿瘤治疗效果。
课题目标
1. 谷胱甘肽敏感 NO 供体聚合物聚乙二醇-聚硝酸酯碳酸酯-聚乙烯亚胺（PEG-PNEC-PEI）的合成和表征
- 以聚合物聚乙二醇-聚硝酸酯碳酸酯-聚乙烯亚胺（PEG-PNEC-PEI）为稳定剂的难溶性抗肿瘤药物纳米结晶的制备和表征
3. 考察稳定剂及其浓度，溶剂种类及体积等因素的影响
4. 考察纳米结晶在不同种类肿瘤细胞（如 A549、Hela 和 MCF-7细胞）中的摄取及毒性
研究方法
