重组水蛭素（Ⅲ）对大鼠硒性白内障防治作用文献综述

姓名

李大鹏

学号

0944406

专业

海洋药学

指导教师

谭树华

课题名称

重组水蛭素（Ⅲ）对大鼠硒性白内障的防治作用

课题性质

radic; 基础研究 应用课题 设计型 调研综述 理论研究

1.开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）

研究背景

水蛭始载于《神农本草经》，列为下品。苏恭谓：有水蛭, 今俗多取水中小者, 用之大效。传统中医药认为水蛭性平，味咸、苦, 有毒。破血， 逐淤，通经。现代研究表明，水蛭素是蛭类动物唾液腺分泌的一种酸性多肽，含有65 ～ 66 个氨基酸残基，分子中含3 对二硫键，在1-49 位形成了高度折叠、致密的三级结构，使此结构域稳固，线形的C 端序列用以结合凝血酶。水蛭素是凝血酶的特异性抑制剂，可以与凝血酶以等摩尔比形成非共价键结合的稳定复合物，能有效预防和治疗弥散性血管内凝结，在治疗心血栓及脑血栓等疾病方面均有显著作用。自1986 年，Harvey分离出水蛭素的cDNA，采用基因工程的方法大量制备重组水蛭素。目前已上市的重组水蛭素制品有Lepirudin( Berlex labortories) ，Desirudin( Ciba Europeharm) 和Bivalirudin( Medicines) 。白内障是眼组织晶状体退行性病变与自然衰老的过程，一般呈垂直性发展，最终导致晶状体混浊失明，是最主要的致盲原因。因其发病机理尚属未知，手术摘除混浊的晶体仍是主要治疗手段。白内障摘除及人工晶体植入术虽已相当成功，但受医疗发展水平的限制，费用也较高，使抗白内障药物的研究已成为防盲工作的重点之一。目前天然水蛭素对凝血酶诱导的血小板聚集的抑制作用的研究比较多，对其防治白内障的作用尚未见报道。

研究目的

本文通过观察重组水蛭素（Ⅲ）对硒性白内障的影响，利用亚硒酸钠生理盐水溶液造成大鼠硒性白内障，确定重组水蛭素（Ⅲ）滴眼后对硒性白内障的防治作用，并初步探讨其作用机制及其安全性。

论文课题研究进度安排

第一周至第三周：文献调研、试验方案的确立以及试验材料等的准备；

第四周：构建大鼠硒性白内障模型；

第五周至第九周：对各实验组大鼠进行给药；

第十周至第十一周：检测晶状体混浊程度，测定SOD活性、MDA含量、AR活性等相关参数；

第十二周：数据处理及论文写作；

第十三周：论文答辩。

研究方法

1.实验过程

1.1实验分组

取SD大鼠随机分成7组：正常对照组，模型对照组，苄达赖氨酸对照组，白内停对照组，低剂量重组水蛭素（Ⅲ）：浓度为500U/ml,中剂量重组水蛭素（Ⅲ）:浓度为1000U/ml,高剂量重组水蛭素（Ⅲ）：2000U/ml

1.2大鼠硒性白内障的复制方法

10日龄SD按20ml/kg剂量颈背部皮下注射1mM亚硒酸钠生理盐水溶液，隔日一次，共三次。正常对照组颈背部皮下给予同体积的生理盐水。

1.3给药方法

造模前3天分别用水蛭素滴眼基质、苄达赖氨酸滴眼液、白内停滴眼液、低、中、高剂量重组水蛭素（Ⅲ）滴眼液滴眼，每日3次，1滴/次，连续给药30天。

2.检测指标

2.1裂隙灯检测晶状体混浊程度

造模后，按不同时间点用1%阿托品滴眼液散瞳，裂隙灯显微镜检查晶状体情况并记录。裂隙灯下晶状体混浊程度；按下列标准分级：

0晶状体透明，无混浊；

Ⅰ晶状体核缝混浊，其余透明；

Ⅱ晶状体核混浊，皮质透明；

Ⅲ晶状体核混浊，并有片状皮质混浊；

Ⅳ晶状体全部混浊。

2.2大鼠晶状体的扫描电镜形态分析

取大鼠晶状体，戊二醛固定，脱水，经临界点干燥后，沿晶状体前后抽断裂样品暴露观察面，离子镀膜仪喷金镀膜，扫描电镜观察，摄影，加速电压20KV。

2.3晶状体中超氧化物歧化酶（SOD）活性及丙二醛（MDA）含量测定

取大鼠晶状体，吸干表面水分称重，按试剂盒操作测定晶状体SOD活力活性及MDA含量。

2.4 晶状体醛糖还原酶（AR）测定：取大鼠晶状体，置于冰生理盐水中，精密天平称重，冰浴下制成10%组织匀浆，高速冷冻离心机10000g，离心15min，取上清液进行AR活性的测定。

2.5统计方法

各组与模型对照组数据比较采用组间t检验。

文献综述

研究表明，硒性白内障主要发生在核区，一般在给予亚硒酸盐3d-4d后即可出现双侧核性白内障，而皮质性浑浊则发展缓慢，一般15d-30d后才出现皮质性白内障。皮质性白内障由赤道部空泡形成浑浊，最终渐进发展。核性白内障是永久的，而皮质性白内障在6周至4个月内可以恢复，浑浊变的清晰，表明晶状体有一定的修复能力。研究皮质性白内障修复过程中生化特点，对理解人类晶状体的修复过程很有帮助。

相关研究证实，亚硒酸钠性白内障的发生和发展与自由基损伤有关。SOD、AR等酶类对机体的氧化与抗氧化平衡起着至关重要的作用。SOD能清除超氧阴离子自由基，保护细胞免受损伤。MDA是不饱和脂肪酸过氧化过程产生的。本研究中将表明硒性白内障与SOD活力、MDA含量的相关性，证明重组水蛭素（Ⅲ）对硒性白内障晶状体脂质过氧化反应具有良好的调控作用，可调节酶促系统，增强晶状体的抗氧化能力，通过提高和恢复SOD活力，清除MDA等有害过氧化物代谢产物，阻断脂质过氧化连锁反应，达到预防和治疗硒性白内障的功效。

参考文献

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