开题报告内容:(包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述,不少于2000字)
一.拟研究及解决的问题:
1.1熟悉并了解内质网应激基因调控的机制和研究进展
1.2掌握方法并研究肺癌细胞给与重楼皂苷I后内质网应激基因的调控
1.3学习并熟练掌握CCK-8法,qRT-PCR,Western blot和流式细胞检测的方法
二.研究手段:
2.1 CCK-8法检测细胞增殖
收集对数期细胞,调整细胞浓度为/mL, 以每孔100micro;L接种于96孔板, 设6个平行孔。37℃、5% CO2条件下孵育,待细胞生长至60%~70%汇合时,加入含不同浓度(1、2、3、4、5 mu;mol/L)重楼皂苷I的培养基,同时设立不加药组(0 micro;mol/L)为阴性对照组,无细胞组为空白对照组,继续孵育6、12、24 h后, 吸弃含药培养基,新鲜培养基与CCK-8按10:1的比例加入100micro;L,继续孵育1 h后放于酶标仪上检测(检测波长为450 nm,参比波长为650 nm)各孔吸光度(D)值。计算细胞的存活率和半数有效浓度()。
2.2 qRT-PCR(Real-time quantitative PCR)
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