开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）
多糖是由多个单糖分子缩合、失水以糖苷键结合而成的大分子化合物，广泛存在于生命体的细胞中，承担着能量存储、运输以及结构支撑等作用。许多多糖已被认为是免疫调节剂和抗氧化剂，同时它们的体外抗肿瘤活性已成为近年来的研究热点[1]。近年来灵芝等补益中药在提升免疫，抗肿瘤方面得到了广泛利用，而多糖成分在抗肿瘤免疫效果中起到重要作用。本课题主要目的在于对灵芝多糖的分离分析以及对灵芝多糖在抗肿瘤免疫活性作用中的初步探索。
由于多糖的化学结构本身就很复杂、微观不均一性等使多糖的化学结构难以得出完全正确的结构式。大多数灵芝多糖主要通过（1→3）、（1→4）和/或（1→6）-alpha;/beta;糖苷键连接的葡聚糖，主要的单糖组分为葡萄糖，甘露糖，半乳糖，木糖，果糖和阿拉伯糖，相对分子质量从几千到上百万不等[2]。
研究表明，具有抗肿瘤活性的多糖结构都是以（beta;-1,3）结构为主链，（beta;-1,6）为侧链，且高分子量的多糖抗肿瘤活性比低分子量多糖更好[3]。林志彬[4]发现灵芝多糖B的抗肿瘤作用是源于其免疫调节的作用，机体内产生的抗肿瘤机制是由免疫学机制介导，是由灵芝多糖通过激活小鼠体内肿瘤坏死因子alpha;（TNF-alpha;）和T淋巴细胞产生的干扰素gamma;（IFN-gamma;）来诱导肿瘤细胞的凋亡。Pan等[5]研究发现灵芝多糖GLP使胃癌大鼠血清细胞因子IL-6的水平较正常对照大鼠显著减少，而显著增加血清细胞因子 IL-2，IL-4，IL-10 的水平，同时降低了胃组织中过氧化物的水平，使胃癌所致血清抗氧化酶SOD、CAT和GSH-Px水平趋于正常，证实灵芝多糖在机体免疫调节中起重要作用。
本课题准备从灵芝多糖的提取分离入手，解析并分离出灵芝中含有的有效多糖成分，然后以该多糖为对象进行其抗肿瘤免疫活性的初步研究。
对于灵芝中含有的多糖的具体组成，我们将以热水浸提法提取出后，通过高效液相色谱法（HPLC）对灵芝提取多糖成分进行分析，然后将其与一些多糖标准品的HPLC谱图进行对比，以解析出灵芝多糖的实际成分。高效液相色谱法（HPLC）主要通过对多糖进行水解及衍生过程来分析多糖的组成，此方法用样量少，灵敏度高，分离效果理想，同时可以检测多种单糖等优点[6]。
具体提取分析方法：
取干燥灵芝药材粉末做几组对照试验，在不同温度热水中浸提灵芝多糖，每组多糖提取时间长短不一。提取后的粗多糖离心取上清液；上清液超滤分离，再减压蒸馏浓缩。用savage试剂除蛋白，用体积分数 95%的乙醇分级醇沉，收集乙醇体积分数为 80%的醇沉组分，经过冷冻干燥后，即为胞内多糖（GLP-In）。 胞外（GLP-Ex）的制备参照文献[9-10]，稍作修改，其中 GLP-Ex 仅是低相对分子质量的多糖，GLP-Ex1 是用体积分数 80%乙醇溶液沉淀透析后得到的胞外多糖，两者都用透析袋透析[1]。
灵芝多糖总糖含量的测定：用苯酚-硫酸法检测灵芝多糖的总糖含量[7]。
灵芝提取物通过水提醇沉后,得到灵芝粗多糖。采用三氟乙酸进行全水解,以1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)衍生化后,采用HPLC法于250 nm波长处检测单糖组成及含量[8]。灵芝提取物多糖Mw的测定：取几种多糖标准品用流动相制备成一定浓度的对照品溶液。取提取的灵芝粗多糖加流动相后离心，取截留液作为供试品溶液，待进样分析。高效液相色谱仪流动相：0.2 mol·L-1氯化钠溶液；流速：0.5 mL·min-1；柱温：40 ℃ ；进样量：50 mu;L[8]。
