开题报告内容:(包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述,不少于2000字)
1.拟研究的问题
本课题拟利用偶联生物素(Biotin)的标记探针为标记试剂,建立以蛋白质表面标记技术为基础的药物靶标发现技术。
2.研究手段:
拟采用化学标记方法,进行蛋白质表面修饰。针对赖氨酸侧链氨基,利用脱硫生物素-琥珀酰亚胺(Desthiobiotin-NHS),与氨基反应进行表面标记10min。终止反应后,利用甲醇氯仿沉淀除去多余Desthiobiotin-NHS,并用8M Urea溶解沉淀的蛋白。用Trypsin LysC将蛋白切成肽段后,利用C18 SPE柱回收肽段。溶解肽段后,利用Streptavidin Beads,纯化/富集脱硫生物素标记的肽段。利用Biotin或酸性缓冲液洗脱富集的肽段 ,经C18 柱脱盐后,利用LC-MS检测并鉴定肽段。同时,Streptavidin Beads结合后上清肽段也用于LC-MS分析,比较富集效率。
3.成果形式:
整理实验报告,并撰写毕业论文。
4.预期工作进度:
2020.02 – 2020.03 阅读文献,准备开题报告,进行前期的实验准备;
2020.04 – 2020.05 准备该课题所需实验材料、方法,通过学习掌握实验技能;
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