hMGH蛋白的表达与检测文献综述

 2023-01-10 04:01

开题报告内容:(包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述,不少于2000字)

课题背景:

抗体,又称免疫球蛋白(immunoglobulin,简称Ig),是一种由B淋巴细胞分泌,被免疫系统用来鉴别与中和外来物质如细菌、病毒等的大型Y形蛋白质,仅被发现存在于脊椎动物的血液等体液中,及其B细胞的细胞膜表面。抗体能识别特定外来物的一个独特特征,该外来目标被称为抗原。蛋白上Y形的其中两个分叉顶端都有一被称为互补位(抗原结合位)的锁状结构,该结构仅针对一种特定的抗原表位。

hMGH是一种人源蛋白,其中含有一段由CPN1基因编码的蛋白CPN1,该序列形成的蛋白功能区具有羧肽酶活性,这种蛋白称为羧肽酶N催化链。以下是hMGH蛋白的肽序:

MSDLLSVFLHLLLLFKLVAPVTFRHHRYDDLVRTLYKVQNECPGITRVYSIGRSVEGRHLYVLEFSDHPGIHEPLEPEVKYVGNMHGNEALGRELMLQLSEFLCEEFRNRNQRIVQLIQDTRIHILPSMNPDGYEVAAAQGPNKPGYLVGRNNANGVDLNRNFPDLNTYIYYNEKYGGPNHHLPLPDNWKSQVEPETRAVIRWMHSFNFVLSANLHGGAVVANYPYDKSFEHRVRGVRRTASTPTPDDKLFQKLAKVYSYAHGWMFQGWNCGDYFPDGITNGASWYSLSKGMQDFNYLHT

NCFEITLELSCDKFPPEEELQREWLGNREALIQFLEQVHQGIKGMVLDENYNNLANAVISVSGINHDVTSGDHGDYFRLLLPGIYTVSATAPGYDPETVTVTVGPAEPTLVNFHLKRSIPQVSPVRRAPSRRHGVRAKVQPQARKKEMEMRQLQRGPA

(其中黄色部分是本课题的目的蛋白序列)

羧肽酶N是等血浆金属蛋白酶,可专一性地从肽链的C端开始逐个降解,释放出游离氨基酸的一类肽链外切酶。以酶原形式存在于生物体内。这种酶在多肽的调控中起重要的作用,如激酶和过敏毒素,所以它也被称为激酶-1和过敏毒素灭活剂。这个基因编码催化亚单位是由两个相同的调控亚单位和两个相同的催化亚单位组成的四聚体。这种基因的突变与血管性水肿或羧肽酶N不足所引起的慢性荨麻疹有关。

大肠杆菌表达系统是基因工程中应用最广泛的也是最有效的表达重组蛋白的系统。大肠杆菌是目前遗传和生化背景最清晰的有机体,它良好的研究背景、易生长易操作的优点使其成为表达外源蛋白的首选系统。用传统方法难以制取的蛋白质、细胞因子等新型药物可以在大肠杆菌中大量表达生产。目前很多商品化的药用蛋白如胰岛素、干扰素、生长因子等都是用大肠杆菌系统生产的,占所有药用蛋白的三分之一。本课题使用的表达系统就是大肠杆菌表达系统。

我们针对hMGH其中一段氨基酸序列设计抗体,将这段氨基酸序列进行表达形成多肽,通过免疫方法获得多克隆抗体或者单克隆抗体。单克隆抗体既由单一B细胞分泌产生的抗体,相对于由多种B细胞分泌形成的多克隆抗体而言,故称为单克隆抗体。本课题旨在设计合理的表达系统获得目标多肽,并对相关的检测方法进行摸索于确定。

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