开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）
一、拟研究或解决的问题
1.熟悉去氧鬼臼毒素的结构、理化性质、来源等
2.掌握去氧鬼臼毒素的药理学、药代动力学研究进展
3.掌握内质网及内质网应激在癌症发生、发展、药物治疗中的作用
4.学习使用各种研究手段进行实验操作
二、采用的研究手段
应用 CCK-8 法、流式细胞术、细胞划痕实验、DCFH-DA 法和Western blot等实验方法
- CCK-8法检测细胞增殖
取对数生长期NCI-H35细胞，以 2times;103个/mL 接种到96孔微孔板中，每孔100mu;L，培养过夜使细胞贴壁。使用不同浓度的 DPPT（0、0.5、1、2、4、6、8、10、15 mu;mol/L）分别处理细胞24h和48h，每组设置4个复孔。按照试剂盒说明书每孔加入10 mu;L CCK-8 试剂，继续培养2h。最后用酶标仪测定450nm波长下的光密度（OD）值。以处理组OD值/对照组OD值times;100%作为生存率。
- 流式细胞术检测细胞周期和凋亡率
取对数生长期 NCI-H358 细胞，以 2times;105 个/mL 接种于6孔板中，0、3、6 mu;mol/L DPPT 处理48h后，用 0.25%胰酶消化，2000 r/min离心5 min，收集细胞，PBS洗2次，1000r/min离心10 min后弃上清液，500mu;L 70%乙醇4℃固定过夜。加入RNA酶消化，使用碘化丙啶（PI）避光染色 30 min，FACScanTM流式细胞仪进行细胞周期分析，重复实验3次。细胞凋亡采用 PI/ Annexin V-FITC双染法，将细胞重悬于200mu;L Binding Buffer 中，加入10mu;L Annexin V-FITC，室温避光孵育15min，使用 FACScanTM 流式细胞仪检测细胞凋亡率。
