一、课题背景
1.无菌检查法系用于检查药典要求的药品、生物制品、医疗器具、原料、辅料及其他品种是否无菌的一种方法。若供试品符合无菌检查法的规定，仅表明供试品在该检验条件下未发现微生物污染。
2.A产品主要用于：①消化性溃疡出血、吻合口溃疡出血。②应激状态时并发的急性胃黏膜损害，和非甾体类抗炎药引起的急性胃黏膜损伤;③亦常用于预防重症疾病(如脑出血、严重创伤等)胃手术后预防再出血等;④全身麻醉或大手术后以及衰弱昏迷患者防止胃酸反流合并吸入性肺炎。
3.用法用量：静脉注射。一次40mg,每日1～2次。临用前将10ml专用溶剂注入冻干粉小瓶内，禁止用其它溶剂溶解。本品溶解后必须在2小时内使用，推注时间不少于20分钟。
- 要解决的问题
依据《中国药典》2015年版四部1101无菌检查法进行A样品无菌检查方法适用性试验，以确认所采用的无菌检查方法适合于该产品的无菌检查。（来源：江苏奥赛康药业股份有限公司，规格：20mg，批号：160601，验证预计开始日期：2016.06.29）。
- 可行性分析
注射用剂必须进行无菌检查法，以确保原、辅料和相关器具的完全洁净。A产品所需检验工具和试剂均便宜易得，其中涉及的大型烘干装置等基本不具有危险性，实验过程所需人员较少，具有较高的投资性价比。且实验步骤较简单，便于操作。
- 研究方法和内容
- 菌液制备
1.1 分别接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至10ml胰酪大豆胨液体培养基中，置30～35℃培养18～24小时，分别取上述培养物用9mlpH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液10倍递增稀释制成每1ml含菌数小于100cfu的菌悬液。
1.2 接种生孢梭菌的新鲜培养物至12ml硫乙醇酸盐流体培养基中，30～35℃培养18～24小时，取上述培养物用9mlpH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液10倍递增稀释制成每1ml含菌数小于100cfu的菌悬液。
1.3 接种白色念珠菌的新鲜培养物至10ml沙氏葡萄糖液体培养基中，置20～25℃培养24～48小时，取上述培养物用9ml pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液10倍递增稀释制成每1ml含菌数小于100cfu的菌悬液。
1.4接种黑曲霉的新鲜培养物至沙氏葡萄糖琼脂斜面培养基上，置20～25℃培养5～7天，加入3～5ml含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液，将孢子洗脱。然后，采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用9ml含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液制成每1ml含孢子数小于100cfu的孢子悬液。
