开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）
- 课题背景
肿瘤严重影响着人类健康，目前人类已知的癌症种类已经超过200多种。肿瘤细胞产生耐药性仍是目前肿瘤治疗中面临的一大难题。在反复多次使用化疗药物后，少数肿瘤细胞能抵抗化疗药物的杀伤作用而存活下来并不断增殖，导致患者肿瘤复发，这严重影响了癌症患者的生存质量。肿瘤细胞为了适应高氧化应激（ROS）的内环境，抗氧化能力会得以提升并可导致其耐药性增强。肿瘤细胞对于化疗药物的耐受性分为先天性耐药和获得性耐药。先天性耐药是指肿瘤细胞在未接触药物时，耐受相关因子就已存在肿瘤细胞内；获得性耐药则是接触药物后，肿瘤细胞内相关信号通路代偿性反应，某些基因或其表达发生改变，使得化疗效果降低[1]。
顺铂是一种被广泛应用于肿瘤化疗的药物,以顺铂为基础的联合化疗已经在多种疾病中表现出了极为重要的抗肿瘤活性,例如睾丸癌、卵巢癌、骨肉瘤、小细胞肺癌等,尤为突出的是,顺铂与依托泊苷、博来霉素联用治疗睾丸癌的有效率达95%以上。尽管如此,由于受到细胞获得的或固有的耐药性的影响,其对其他肿瘤的疗效还是非常有限[2]。
近来，纳米粒子在肿瘤治疗方面的研究取得了很大的进展。比较常见的是纳米粒子作为载体通过包裹一些难溶的药物，从而实现缓控式或靶向治疗。但是这些纳米粒子自身并没有治疗效果[3]。现在，研究发现金属纳米粒子比如说金纳米、银纳米、铂纳米等都可以像化疗药物一样具有治疗肿瘤的效果，但同时也具有一些毒副作用。
研究发现铂纳米粒子可以进入细胞，并且有证据表明它可以造成DNA的损伤以及具有抗氧化的作用[3]。事实上，铂纳米粒子是通过在低的pH的条件下（比如说细胞内吞体中）释放铂离子来杀死肿瘤细胞的[4]。特别是当铂纳米粒子的直径小于3nm之后，超过50%的铂原子会聚集在铂纳米的表面，从而增加了氧气以及水中溶解氧的吸收，加快了铂纳米粒子的表面腐蚀，其铂离子的释放速度也会加快。
在作用机制方面，细胞内ROS（主要包括超氧阴离子、羟自由基、过氧化氢等）水平轻度增高，能降低细胞内 P-gp的水平；而大量 ROS能引起细胞内的氧化应激，从而增加 Mdr的表达，进一步增加 P-gp的产生，肿瘤细胞获得耐药性状。而研究表明[5]，铂纳米粒子由于其较大的表面积，它可以起到SOD/过氧化氢酶类似物的作用来清除自由基，从而起到抗耐药的作用。
- 要解决的问题
- 形貌可控、粒径均一、单分散的铂纳米粒子的合成。研究发现小粒径的铂纳米粒子由于其比表面积较大，更容易进入细胞，其释放铂离子的速度也更快[4]。所以我首要解决的问题是合成小粒径球形的铂纳米粒子。
- 铂纳米粒子的细胞毒性、治疗剂量及效果的研究。铂纳米粒子同化疗药物一样，在起到治疗效果的同时也具有一定的细胞毒性。所以铂纳米粒子的细胞毒性，最佳的治疗剂量以及治疗效果是我课题的主要研究问题。
- 铂纳米粒子进入细胞的方式以及抗耐药机制的研究。这是在确定铂纳米粒子对耐顺铂类细胞具有治疗效果的基础上所进行的进一步分析研究。
- 可行性分析
铂纳米粒子由于其良好的催化性能，其合成方面的研究还是比较多的。但形貌可控、粒径均一、分散性好的铂纳米粒子的合成仍然是个难点。我通过文献查找，得到了一些合成小粒径球形铂纳米粒子的方法。
铂纳米粒子对于肿瘤的治疗是近年来铂应用的一个新兴领域。已有研究表明[6]，铂纳米粒子能够抑制人肺癌细胞的增殖，并且在体内也能够抑制实体瘤的生长。另外，研究表面铂纳米粒子还可以诱导人宫颈癌细胞死亡，并且使G2/M期细胞周期停滞[7]。最近，研究表明自组装的铂胶体簇可以克服顺铂的耐药性问题[4]。所以铂纳米粒子对于耐顺铂类细胞的治疗还是具有很好的研究前景。
- 研究方法和内容
1、在PVP为保护剂的情况下，用乙二醇为溶剂和还原剂在110℃下还原六氯铂酸合成铂纳米粒子[8]。在此过程中，利用紫外可见吸收光谱、TEM、粒度仪等方法来证实合成的铂纳米粒子的形貌及粒径。
2、通过MTT实验来验证细胞毒性问题。以不同浓度的铂纳米粒子的培养液来孵育细胞，并通过光学显微镜观察以及染色等方法确定细胞的存活情况。
