一、课题解决的问题本课题通过建立葡聚糖硫酸钠（dextran sulfate sodium, DSS）诱导的小鼠溃疡性结肠炎（ulcerative colitis, UC）模型，灌胃给予FITC-dextran，测定疾病活动指数（disease activity index, DAI）、结肠长度、结肠组织髓过氧化物酶（myeloperoxidase, MPO）活力和病理损伤情况，考察中药活性成分AMD的治疗作用；测定血清FITC-dextran水平及结肠组织紧密连接蛋白Occludin、ZO-1、E-cadherin和Mucin-2 mRNA水平，考察AMD对肠黏膜屏障的保护作用。
采用TNF-alpha;（100 ng/mL）为诱导剂，Caco-2细胞为工具细胞，建立体外细胞屏障损伤模型，测定细胞跨膜电阻（transepithelial electrical resistance, TEER）值和Occludin、ZO-1水平，考察AMD对细胞屏障损伤的保护作用。
上述研究成果预期有助于为AMD的开发利用提供理论依据，亦为抗UC药物的研发提供新思路。
注：研究过程中需建立体内外肠黏膜屏障损伤模型，并测定多种因子的蛋白和mRNA水平，方法技术方面有一定的难度，实验开展之前应调研并熟练掌握所需方法学如DSS诱导的小鼠结肠炎、western blotting和Q-PCR等。
二、研究方法和技术路线研究方法1) 采用2.5%的DSS复制小鼠UC模型，每日灌胃给予AMD（12.5, 25 mg/kg）和5-氨基水杨酸(200 mg/kg)，连续10天；2) 建模后，每天观察并记录小鼠体重、腹泻程度以及隐血情况，进行DAI评分计算；3) 第十天处死小鼠，取出结肠，测量后拍照保存；固定远心端结肠组织，常规脱水后用石 蜡包埋，经H5) 称取适量结肠组织，用Q-PCR法检测Occludin、ZO-1、E-cadherin和Mucin-2 mRNA水 平；6) 肠通透性测定：第十天，小鼠灌胃给予FITC-dextran，4h后眼底静脉丛取血并离心 20min（4℃，3000rpm），取上清。
用全波长酶标仪（激发波长，485nm；发射波 长，525nm）测定并记录吸光度值；7) TEER测定：将Caco-2细胞接种在24孔板上的聚酯膜过滤器上（孔径为0.4mu;m；表面积 为0.33 cm2）。
将培养基分别添加至顶室和底室，隔天换液1次，最多21天。
在形成完 整单层后，使用上皮细胞ERS-2体积计（Millipore；Bedford，MA,USA）测量TEER水 平；8) 用Western blotting法测定Caco-2细胞中Occludin和ZO-1 mRNA和蛋白水平。
技术路线 三、研究计划 2021年2月27日---3月20日 查阅文献，确定选题，撰写开题报告。
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