开题报告内容:(包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述,不少于2000字)
拟研究或解决的问题:
本课题拟在前期研究基础上,考察益气复脉粉针对LPS诱导活化的小胶质细胞炎症改善作用。为益气复脉粉针改善神经炎症,提供脑缺血保护提供参考依据。
采用的研究手段:
(1)小胶质细胞(BV2)培养
选用稳定的小鼠小胶质细胞株BV2,用含10%胎牛血清的DMEM培养基培养,长满瓶底的80%时,倒去培养基,PBS洗两次,加入新鲜培养基轻轻吹打使细胞悬浮,计数,按105个/ml接种至培养瓶中,于37℃,5%CO2培养箱中培养。选均匀铺满瓶底,胞浆饱满,生长良好状态均一的细胞供实验用。
(2)LPS诱导BV2细胞炎症模型制备
将BV2加入LPS(终浓度为1mgml-1)孵育4h制备炎症模型。BV2分组为①空白组;②模型组;③药物组:给予高、中、低三种浓度的益气复脉粉针(终浓度分别为100、200、400mgml-1);④阳性药组。除①组外其余各组均加入LPS造模。提前12小时给药。
(3)Griess法检测NO含量
NO在体内或水溶液中易氧化生成NO2--,在酸性条件下与重氮盐磺胺发生重氮反应,并生成重氮化合物,后者进一步与萘基乙烯基二胺发生偶合反应。该反应的产物浓度与NO2浓度具有线性关系,在540~560nm处有最大吸收峰。LPS造模后收集细胞培养上清,用GRIESS法检测细胞释放到培养基上清中的NO含量。
剩余内容已隐藏,您需要先支付 10元 才能查看该篇文章全部内容!立即支付
