肾切片模型研究部分中药单体对转运体Oat1、Oat3和Oct2的作用文献综述

 2022-12-28 09:12

开题报告内容:(包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述,不少于2000字)

【拟研究的问题】

肾是机体最主要的排泄器官,肾脏中转运体在肾脏药物排泄中发挥重要的作用,影响药物的肾脏排泄和肾脏分布、介导药物的肾脏毒性、也是药物药物相互作用的靶点之一。

中药作为传统文化的一部分,相对于现代西药具有十分独特的效果,随着现代研究技术的不断进步,中药的药理研究也得到了长足的发展。本次实验选定一些用于治疗肾病或某些具有肾毒性的中药单体或中药材的主要成分,并通过肾切片摄取模型探究选定的中药单体与肾脏基底膜侧三种主要转运体Oat1、Oat3和Oct2的作用(抑制剂或诱导剂/激动剂),为以后中药临床应用和研究提供一定的参考。

【采用的研究手段】

实验采用在离体状态下,新鲜肾组织切片,37℃,5%CO2环境中模拟体内环境,进行药物孵育一定时间后,并测定药物在肾中摄取的实验方法。

肾切片操作流程

① 准备: K-B 缓冲液(120 mM NaCl, 16.2 mM KCl, 1 mM CaCl2, 1.2 mM MgSO4, 10 mM NaH2PO4/Na2HPO4, 用 NaOH 将 pH 调至 7.4)冰上持续通碳合气;打开 37℃孵箱,放入预孵育液;打开切片机电源预热机器,安装刀片,高度调零;

② 取肾: 大鼠禁食 8h 左右,腹腔注射 20%乌拉坦(体重/100*0.6~0.8 即为注射所用体积, 单位为 mL),剖开腹腔后,找到腹主动脉放血,观察左肾由鲜红变黄时立即取下,置于氧饱和的缓冲液内(大皿,放在冰袋上),迅速取右肾; 剥离双肾包膜,用刀片切取合适大小肾皮质,立即置于冰上的 K-B 缓冲液内以维持活性;

③ 切片: 切片槽中放入少量冰块,稍擦干肾皮质切面, 用 502 胶水固定切面于切片槽中(见下图), 等待 1.5 min 左右待胶水干透后, 用胶头滴管添加冰的氧饱和的 K-B 缓冲液,使肾皮质浸润其中。 调整刀架角度为 10-15°,振动幅度及切片速度维持黑色记号笔处标记不动, 启动切片机, 切取每片300 mu;m 厚,约 10-20 mg 置于冰的 K-B 缓冲液。

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