开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）
一：选题的目的与意义
目前，临床上针对胶质瘤的标准治疗方案为手术切除联合放化疗。替莫唑胺( TMZ) 是一种新型的口服烷化剂，由于它能穿过血脑屏障到达患者的肿瘤病灶，发挥持久的治疗作用，广泛用于胶质瘤的联合治疗。但是，由于替莫唑胺耐药性的产生，使得患者的生存期缩短预后差。这种耐药性产生的机制十分复杂，主要包括 DNA 修复酶的激活，表皮生长因子受体( EGFR) 和半乳凝素-1 的过表达，p53，双微体 2( Mdm2) ，磷酸酶及张力蛋白同源基因( PTEN) 以及 miRNAs的异常调控。因此，探讨胶质瘤对替莫唑胺耐药性的产生机制以及如何有效地降低替莫唑胺耐药性，提高其疗效已经成为需要迫切解决的问题[1]。本次研究的课题从替莫唑胺的耐药机制入手，研究千层纸素在抗肿瘤方面的作用并探究千层纸素如何逆转替莫唑胺的耐药机制，达到降低其耐药性、提高替莫唑胺的治疗效果等目的。
二：国内外背景研究
胶质瘤是一种原发性脑肿瘤，其恶性程度高，约占所有原发性神经系统肿瘤的 30%。致死率在35岁以下的全部恶性肿瘤中居第二位。其中，多形性胶质母细胞瘤( glioblastomamultiform，GBM) 又占脑胶质瘤的一半以上，其恶性程度最高，每年的发病率约占百万分之五。因为多型性胶质母细胞瘤生长快速，侵袭性强，仅靠手术很难完全切除，这使得脑胶质瘤极易在术后复发［2］。 据有效数据统计，原发性的多型性胶质母细胞瘤多发于年龄大于 55 岁的患者，而继发性的多型性胶质母细胞瘤多发于年龄在55 岁以下的患者，大多是由低级别的胶质瘤发展而来，只占多型性胶质母细胞瘤的10% 左右［3］。目前，对胶质瘤的治疗主要是手术切除联合放化疗，临床实践证明化疗可以有效提高恶性胶质瘤患者的生存时间与生存率。替莫唑胺( temozolomide，TMZ) 是一种口服烷化剂，能穿过血脑屏障直达病灶，是临床上化疗脑胶质瘤的一线常用药物之一［4］。替莫唑胺通过攻击肿瘤细胞的 DNA，致使 DNA 烷基化受损，损伤的部位主要在N7，N3，O6 位的鸟嘌呤以及 O3 位腺嘌呤上，DNA 烷基化受损以后会产生交联，从而诱导癌细胞死亡［5］。有研究表明，用替莫唑胺治疗人脑胶质瘤的有效率约为45%［6］。其中，脑胶质瘤对替莫唑胺产生耐药性是导致化疗失败的最主要原因。有文献研究［7］发现，脑胶质瘤产生替莫唑胺耐药性不是由单一因素影响导致的，主要还包括 DNA 损伤修复，肿瘤细胞中促癌与抑癌基因的表达，化疗药物刺激后机体的应急反应以及药物对组织的渗透性等方面。
化疗药物是肿瘤治疗的基础和主要途径, 但因其毒副作用较大, 使临床应用受到一定限制。因此，各国药物学家致力于寻找高效低毒的天然药物或新的化学药物。中药或中药提取物一般具有活性好、毒性低的优点，已成为当前抗癌药物研究的热点之一。黄芩 (Scutellariae- radix) 系唇形科植物黄芩的干燥根，在临床中属于常用中药。实验研究表明,黄芩除了有传统意义上的抗炎、 抗病毒、 保肝以及保胎等生物活性之外，还具有较强的抗肿瘤作用。黄芩的有效成分是黄酮类化合物，主要有黄芩苷 (baicalin)、 黄芩素 (baicalein)、 汉黄芩素 (wo- gonin)、 汉黄芩苷 (wogonoside)和千层纸素 (oroxylinA) 等。其中千层纸素 (C16H12O5分子量为 284.27，黄色晶体。 近年来，研究人员从不同方面对千层纸素的抗癌作用进行了深入研究。从研究成果来看，千层纸素抗肿瘤的机制有抑制癌细胞的增值、促进癌细胞的凋亡、促进细胞周期的阻滞作用、抑制血管的生成作用、抑制侵袭作用等[8]。千层纸素在胶质瘤中以何种机制逆转替莫唑胺的耐药机制，是我本次课题要探究的部分。
三：研究内容：
本次课题研究的内容主要是以下几个方面：
- 查阅文献，了解Cx43与胶质瘤耐药的关系，以及目前的研究状况。学习体外细胞培养的操作、方法。
- 开展MTT和Annexin V/P流式双染实验，检测替莫唑胺耐药细胞C6/TMZ对化疗药物TMZ的耐受情况，并熟悉相关的实验操作的原理。
- 开展western blot和流式细胞仪检测Cx43及其下游蛋白实验，研究Cx43诱导的胶质瘤细胞替莫唑胺耐药的相关机制。熟悉western blot的实验原理和操作，了解流式细胞仪的工作原理和操作方法。
四：操作方法
本次课题的研究需要学习体外细胞培养、MTT和Annexin V/P流式双染实验的实验操作，熟悉western blot的实验原理和操作。
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