重组人白介素-2(IL-2)的原核表达,复性及纯化文献综述

 2023-02-06 11:02

一.课题背景及意义白细胞介素,简称白介素,是指在白细胞或免疫细胞间相互作用的淋巴因子,它和血细胞生长因子同属细胞因子。

两者相互协调,相互作用,共同完成造血和免疫调节功能。

白细胞介素在传递信息,激活与调节免疫细胞,介导T、B细胞活化、增殖与分化及在炎症反应中起重要作用,天然人白介素(IL-2)是由CD4 Th1细胞分泌的,分子量为15.5KD左右的,包含4个alpha;螺旋束的一种多效细胞因子。

IL-2在人体免疫系统的激活和调控中发挥着重要的作用,其可以作为T细胞的有效生长因子,还可以诱导自然杀伤(NK)细胞增殖、增加NK细胞的裂解活性和淋巴因子激活的杀伤细胞活性、促进B细胞抗体生成和增殖。

[1]细胞表面能够识别IL-2分子的IL-2受体由IL-2Ralpha;,IL-2Rbeta;和IL-2Rgamma;三个亚基组成,其中IL-2分子能够与IL-2Ralpha;单体,IL-2Rbeta;gamma;二聚体以及IL-2Ralpha;beta;gamma;三聚体结合。

当IL-2分子与IL-2Rbeta;和IL-2Rgamma;结合时,能够激发下游的信号传导,在肿瘤细胞的杀伤中起着重要的作用,但是野生型的IL-2分子在临床上并不能有效的用于治疗癌症病人,造成这种结果的原因是,野生型的IL-2分子与IL-2Ralpha;结合时,能够诱导调节性T细胞( Tregs )的产生,Tregs进而抑制其他T细胞的激活和功能,进而影响其对肿瘤细胞的杀伤作用,IL-2诱导NO合成,是其抗肿瘤作用机制之一。

构建工程菌IL-2表达体系, 表达并纯化出具有生物学活性的目的蛋白质。

方法用基因工程方法构建表达质粒;在大肠杆菌中诱导表达基因重组人白细胞介素-2 ;提取包涵体并建立复性条件;用Ni-NTA凝胶纯化出rhIL-2,观察其生物学作用, 以此检测其活性。

为了能够提高IL-2对肿瘤细胞的杀伤作用,本研究前期通过对野生型IL-2分子进行突变,构建出了几种潜在的与IL-2Ralpha;亲和性弱,而与IL-2Rbeta;和IL-2Rgamma;亲和性适中的蛋白分子,本课题将集中在对这些分子的纯化工艺的优化。

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