基于气压泵控制的微流道多重置换扩增文献综述

 2022-11-04 10:11
  1. 文献综述(或调研报告):

文献综述分为两个部分,第一部分是关于如何创造一个稳定的液滴环境的简叙,第二部分是关于如何对实验结果进行分析。

(一)液滴稳定性探索

创造合适的微液滴体系的前提是这个体系具有稳定性。如果将DNA反应的体系作为水相加入微流道芯片的分散相流道中,那么根据疏水-亲水作用原理,其连续相中需要加入有机油相物质(难溶于水)以保证水相分散于油相中,这个体系的形成需要在油相中添加适量的表面活性剂。

可以通过预先混合油与表面活性剂,在微流控芯片上生成稳定液滴的实验来选出最佳的表面活性剂配比。

(二)实验结果分析

关于实验结果的分析,在得到测序数据后,首先用FastQC软件对测序数据进行比对前的数据质控,来确认所有批次的测序数据质量是否稳定。然后再进行数据分析。

其中,最重要的是碱基质量值在reads上的分布图,以下图3-3为例,该数据将显著影响后面单核苷酸变异SNV检测结果的可靠性,以及后续所有流程中是否需要截除末端低质量值区域的判断。图中质量值为Phred分数,可以通过公式:

换算某个碱基位点的Phred分数Q以及发生测序错误的概率P,从图中可知,pair-end文库中的两侧reads的平均质量值均大于30,即错误率小于0.1%,可以认为测序的质量较好,在后续的信息学分析中仅需过滤其中极小部分的低质量reads即可,且这样的操作不影响整体的统计结果。

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