一、拟研究或解决的问题本课题以葛根为研究对象,聚焦葛根与2型糖尿病,通过体外活性实验,筛选不同产地不同批次的野葛与粉葛干预2型糖尿病的活性组分并探究其组分配伍规律,为后续葛根干预2型糖尿病的组分结构确定、组分结构特征解析及制剂方面的研究奠定基础。
二、采用研究手段1.葛根的提取:取不同产地不同批次的葛根(野葛与粉葛),分别提取葛根中的总黄酮和粗多糖,制备多份测试样品。
2.胰脂肪酶、alpha;-淀粉酶、alpha;-葡萄糖苷酶的抑制试验:(1)胰脂肪酶以棕榈酸对硝基苯酯(PNPP)为底物进行胰脂肪酶的活性测定实验,将PNPP用作溶液的底物,该溶液包含:将PNPP的异丙醇溶液添加到Tris-HCl缓冲液制成的试剂,阿拉伯胶,脱氧胆酸钠和Triton X-100中。
奥利司他被用作阳性对照。
将测试样品放入96孔板中,并在Tris-HCl缓冲液中新鲜制备脂肪酶溶液(2型猪胰脂肪酶,Sigma-Aldrich)。
搅拌直至完全溶解,将其加入测试。
放置一段时间后,于一定波长下记录吸光度。
(2)alpha;-淀粉酶将测试样品和alpha;-淀粉酶溶液孵育,向混合物中加入可溶性淀粉溶液,继续孵育。
加入HCl以终止酶促反应,然后加入碘试剂。
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