猫豆ISSR反应体系优化研究
一、课题解决的问题
猫豆是豆科藜豆属植物龙爪藜豆Mucunapruriens(L.)DC.var.utilis的种子，是广西特色药食两用资源，随着近年来对药理研究的不断深入，猫豆在抗帕金森病作用、镇静安眠、抗蛇毒、治疗男性不育症及其营养作用应用等方面均取得了明显进展，尤其是其富含的左旋多巴成为治疗帕金森的首选药后，猫豆以其巨大的潜在应用价值引起了国内外研究人员的广泛关注。目前对猫豆的研究主要集中在药理学和左旋多巴提取领域方面，对猫豆的遗传演化、种质资源评价、遗传育种等方面的研究较少。通过对猫豆ISSR-PCR反应体系进行优化，旨在建立一个极为可靠的猫豆ISSR-PCR反应系统，为进一步研究猫豆的遗传多样性、群体结构以及品种选育等工作奠定一个良好的基础。
二、研究方法和技术路线
考察DNA提取的方法根据文献选择引物单条引物单一因素考察
单条引物正交试验 考察PCR循环次数考察引物及退火温度
确定ISSR-PCR体系
1.提取方法的摸索：比较CTAB法及SDS法两种方法提取DNA的效果，选择最佳的DNA提取方法。
2.单因素考察：选定引物后，用单一变量法，考察Mg2 、引物浓度、dNTPs、TaqDNA酶浓度、DNA模板的量对ISSR-PCR体系的影响，选择最佳浓度作为条件。
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