薯蓣皂苷抗血小板聚集活性研究文献综述

一、课题解决的问题

1、调查薯蓣皂苷类成分的资源分布：广泛分布于薯蓣科、豆科、百合科等植物中，其中在薯蓣属中分布最为广泛。

2、薯蓣皂苷是螺甾烷型甾体皂苷中最为典型的一类，分析薯蓣皂苷元对血小板聚集活性的作用。

3、查阅文献了解到薯蓣皂苷可显著抑制血小板聚集。通过本实验，我们需要了解其可能的作用机制和观察其不良反应。

4、SD大鼠的血液学指标与人体的不一样，我们需要建立适合SD大鼠抗血小板聚集实验的模型，为筛选、开发抗血小板聚集药物提供一种快捷简便、经济有效的实验方法。

5、凝血酶对血液凝固系统的作用包括诱发血小板聚集及继发释放反应等。

二、研究方法和技术路线

实验方法：用LG-PABER血小板聚集仪测定SD大鼠血小板聚集率

实验步骤：

选取身体健康，各项功能均正常的SD大鼠若干，将这些大鼠随机分成实验组和对照组，实验组灌胃给药薯蓣皂苷元，对照组灌胃给药安慰剂（溶剂），连续给药5天，每天给药2次。最后一次给药后，按如下操作：

①．SD大鼠摘取眼球取血，,用3.8%枸橼酸钠按照取血量与抗凝剂9 ：1抗凝处理，加入抗凝管中，要求：取血速度要快，避免溶血，避免加入组织液，及时混匀

②．富含血小板血浆（PRP）的制备：对自然沉降、不同离心速度及不同离心时间进行比较，选择1000r/min离心20分钟为最佳离心条件

③．贫血小板血浆（PPP）的制备：选择3000r/min离心10min为最适离心条件

④．PPP每测定槽加入300ul用以仪器调零

⑤．PRP每检测槽270ul，加入搅拌子，加入受试药薯蓣皂苷30ul ，37℃温育1min

⑥．调试选项选择凝血酶诱导的血小板的聚集行测定，每个测定槽加入凝血酶溶液5ul或10ul，测定时间为300s

⑦．用LG-PABER血小板聚集仪测定对照管与测试管5分钟内的最大聚集率，计算出药物对血小板凝集的抑制率：

聚集的抑制百分率=（对照管聚集百分率-测试管聚集百分率）/ 对照管聚集百分率100%

⑦．检验方法的重复性：重复上述操作，去4个大鼠血样样本，按上述方法，测得血小板5分钟内最大聚集率，根据结果求得标准偏差，若RSDlt;gt;则表面4份平行样本的检测结果偏差不大，此方法的重复性良好。

三、论文课题研究进度安排

2013年3月04日----3月15日 确定选题，查阅文献。

2013年3月15日----3月22日 撰写开题报告。

2013年3月18日----4月1日 进行调查、收集资料、进行分析设计。

2013年4月1日----5月15日 设计系统原型，并提交论文初稿。

2013年5月20日前 修改论文，完善系统

2013年5月30日前 提交正式毕业设计以及相关成果，并进行论文答辩准备。

四、文献综述

目的：研究薯蓣皂苷对静脉血栓形成的影响^[1]，初步探讨建立凝血酶诱导的SD大鼠血小板聚集实验的模型，并了解薯蓣皂苷抗血栓的药理机制。

薯蓣是一种常用的中药^[2]，具有健脾消食，祛痰利水，活血舒筋等功效^[3]。薯蓣皂苷(Diosgenin ,Dio )，广泛存在于薯蓣科、百合科和豆科等植物，其中在薯蓣科植物中含量较为丰富^[4]。薯蓣科(Dioscoreaceae)，单子叶植物，10属850种，广布于全球的温带和热带地区，我国有薯蓣属Dioscorea 1属，约80种，为多年生缠绕草本，主要分布我国南方地区广东、广西、四川、浙江、福建、台湾等省区^{[ 5]}。薯蓣皂苷具有降血脂，抗血小板聚集，促进胆汁分泌，诱导人红白血病（HEL）和人早幼粒白血病（HL-60）细胞分化，,抑制人低分化胃腺癌细胞生长，抑制体外抗肿瘤等多种药理作用^{[ 6]}，同时也是合成各种甾体激素类药物的重要原料，最新研究表明适量浓度薯蓣皂苷元可促进成骨细胞的增殖分化及抑制破骨细胞的形成,进而预防和治疗骨质疏松,且冠心病、脑血管意外等心脑血管缺血性疾病与血小板聚集功能异常、血小板聚集率异常增高有关,薯蓣皂苷这一作用对防治心脑血管缺血性疾病可起着有益的作用^{[ 7]}。就目前而言，关于薯蓣皂苷的药理作机制很多方面尚部明确，多数研究还处于动物阶段，个案研究报道多，缺乏大规模的样本研究，除抗肿瘤外，其他药理作用的研究尚不够深入。近年来，免疫相关性疾病的发病率渐高，尤其是血液系统疾病，薯蓣皂苷既有调节免疫作用，又有激素类作用，对治疗血液系统疾病有着广阔的前景，其作用机理值得我们进一步探讨^[8]。一个稳定的血小板栓字的形成需要经过3个阶段，即血小板黏附，血小板活化扩增和血小板聚集^[9] ,血栓形成是多种因素综合的结果,包括血小板粘附、聚集以及血液凝固,其中血小板粘附、聚集是血栓形成的关键,而且是导致血栓形成的最早反应之一^[10] , 动脉血栓形成初期主要由血管内皮细胞受损,血小板黏附和聚集所致,而静脉血栓一般由血流缓慢或淤滞引起^[11]。抗血小板聚集药物又称血小板功能抑制剂，随着对血栓性疾病发生机制的认识，抗血小板聚集在临床中地位越来越重要，抗血小板聚集药在血栓在血栓性疾病中得到了广泛的应用^[12]。据文献报道,抑制血小板聚集的发生，改变血液循环状态，对抑制血栓的形成和促进血栓的溶解很重要，对血栓性心脑血管疾病的防治也有重要意义^[13]。建立血小板聚集实验的测定方法，可以用于抗血小板聚集药物的帅选，以及重要活血化瘀药物的评价^[14]。所以本实验采用SD大鼠下腔静脉结扎形成血栓，证明薯蓣皂苷对大鼠下腔静脉结扎血栓形成具有抑制作用，能使血清中NO升高，而血管壁内的NO降低，髓过氧化物酶升高，降低血管壁的通透性；血小板聚集特性是其参与止血与血栓形成过程中最重要的因素之一，是血小板活化及其释放反应,膜糖蛋白受体等综合因素的共同表现，是血小板功能检测的基础^[15] 。凝血酶是血小板激活剂,广泛存在于人体各器官组织中,当组织损伤时,诱导血小板聚集,形成血栓,阻止出血^[16]。通过凝血酶诱导血小板聚集，从而测定血小板聚集率，可对血栓性疾病和出血性疾病的诊断与治疗进行初步评估，同时可对薯蓣皂苷抗血小板聚集做出初步评估，来考察薯蓣皂苷对静脉血栓的治疗作用。

参考文献：

1.Rui Zhang, BaoZhan Huang, Dan Du, XiuRong Guo, Guang Xin, ZhiHua Xing, Hong Liang, Younan Chen, QianMing Chen, Yang He, Wen Huang.Steroids(J).ELSEVIER,2013,78:1064-1073

2.Guo hua Gong, Yuan Qing, Wen Huang .Phytomedicine(J).ELSEVIER,2011,18:458-463

3. 张风霞，王新陆，高聆，赵家军. 薯祯皂昔元的研究(J).吉林中医药,2013，33（1）：75-77.

4. 侯娟，何文辉，王明霞，王玉瑛，赵晓志，范顺心. 薯祯皂昔的药理作用（J）.河北医药，2004,26（1）：71.

5.苏艳芳，付晓丽.薯蓣皂苷元衍生物合成及抗血栓形成作用研究（J）.2009.

6.田友清,丁平,寇俊萍,余伯阳. 薯蓣皂苷元对小鼠下腔静脉结扎血栓形成及相关因子的影响(J).现代中药研究与实践，2007,21（1）：32-34.

7.斯其连,周达新. 薯蓣皂苷抗血小板聚集作用的临床观察(J).中国临床药学杂志，2006，

15（4）：238-239.

8. 张伟锋，刘宝山. 薯蓣皂苷的药理作用研究进展(J).世界中西医结合杂志，2010,5(6):543-545.

9．杨宏艳，王晓良.抗血小板药物研究进展（J）.中国药学杂志，2012,47（4）：250

10.李英.抗血小板药物研究进展[J].国外医学药学分册,1996,23(3):156-159.

11. 车薇,李霞,梁艳. 大鼠实验性血栓模型的建立及其应用(J).中国医院药学杂志，2008,28(12)：1045-1050

12.伊小明，赵诗云，彭旦明，饶丽华.SD大鼠血小板聚集实验测定方法的研究（J）.南昌大学学报（医学版），2013,53（8）：6-11

13.陈小萍，刘文，丁航.田七总皂苷对凝血酶诱导的兔血小板聚集的影响（J）.现在医学，2010，38(4):337-339.

14.国家药典委员会.中华人名共和国药典（2010年版）一部（M）.北京：中国医药科技出版社，2010：123.

15．江虹,杨菁,左成华,彭黎明.血小板聚集试验及其临床应用（J）.中国实验诊断学，2001，5(5):241-243.

16. 依巴代提托合提，玛依努尔吐尔逊，毛新民，苏巴提吐尔地.罗勒水提取物对ADP、凝血酶诱导的大鼠血小板聚集的影响(J).新疆医科大学学报，2005,28（6）：256-257