开题报告
- 研究目的
程序性坏死（Necroptosis）是一种新近被发现的细胞程序性死亡方式,受主要信号分子RIPK1、RIPK3、MLKL等调节。RIPK是程序性坏死不可或缺的关键环节。针对RIPK抑制剂的有效性、适应症等问题，我们从分子体系、细胞体系、动物体系构建RIPK抑制剂的筛选体系。针对分子体系：本实验通过ADP-Glotrade; Kinase Assay筛选有效的RIPK抑制剂 ；针对细胞体系：本实验利用CCK8、Western Blot、Luciferase等 方法利用Jurkat FADD-/-细胞系、THP1-HMGB1-Lucia细胞系和MEF细胞系进行筛选；动物模型，本实验主要通过TNF静脉注射建立小鼠全身免疫性疾病模型，通过检测体温和小鼠存活等方法建全动物模型。
二、拟研究或解决的问题
- 分子：通过ADP-Glotrade; Kinase Assay分析RIPK抑制剂的抑制效果。
- 细胞：通过CCK8、Western Blot、Luciferase等方法探究RIPK抑制剂对Jurkat FADD-/-细胞系、THP1-HMGB1-Lucia细胞系和MEF细胞系的影响。
- 动物：探究RIPK抑制剂对TNF诱导的系统性炎症反应综合征小鼠的体温、存活情况和炎性指标的变化。
三、研究手段及内容
- 通过查阅文献的方法，确认并完善RIPK抑制剂筛选的细胞系和诱导方法和检测方法和检测指标，查阅体内模型的建立方法和检测指标。
- 细胞体系的构建：采用CCK8探究Jurkat FADD-/-细胞系和MEF细胞系的坏死情况，采用Luciferase探究THP1-HMGB1-Lucia的坏死情况，采用Western Blot探究RIPK通路的变化情况。
- 动物体系的构建：拟采用TNF诱导的小鼠系统性炎症反应综合征检测小鼠一定时间内体温和存活情况，并取血样检测GCSF、IL-6、CCL3、CCL4、CCL11等指标，对比RIPK抑制剂与野生型小鼠的变化。
- 成果形式
成功构建RIPK抑制剂筛选体系
- 课题进度
第一阶段（十一月至十二月末）建立完善Jurkat FADD-/-细胞模型
第二阶段（十二月末至一月末）初步建立THP1-HMGB1-Lucia细胞模型和MEF细胞模型
- 文献综述
RIPK抑制剂的研究进展
摘 要：受体相互作用蛋白(Receptor-interacting protein, RIP)作为调控程序性坏死的重要激酶，是近年来治疗疾病的新靶标。肿瘤坏死因子受体(Tumor necrosis factor receptor, TNFR)活化后通过泛素化、自磷酸化一系列调节激活受体相互作用蛋白1 (receptor interacting protein kinase1, RIPK1)，RIPK1继续活化受体相互作用蛋白3(receptor interacting protein kinase3, RIPK3)，使其形成低聚物，进而激活混合谱系激酶域样蛋白(Mixed Lineage Kinase Domain-like Protein, MLKL)形成坏死小体(necrosome)，并在细胞膜上形成大量孔状结构，导致细胞由于细胞膜快速裂解而坏死。针对RIPK研发的一系列坏死抑制剂可以用于神经退行性疾病、炎性疾病、坏死相关缺血再灌注损伤和肿瘤的治疗。
关键词：坏死；RIPK；抑制剂
